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洋蓟素对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的影响

来源：吉趣旅游网

·2096·中国免疫学杂志2020年第36卷

doi:10.3969/j.issn.1000鄄484X.2020.17.010

洋蓟素对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的影响淤

张晓文摇郑思琪摇马应卓摇李摇帆摇李娟芳摇(商洛学院,商洛726000)

摇摇中图分类号摇R392摇摇文献标志码摇A摇摇文章编号摇1000鄄484X(2020)17鄄2096鄄04

摇摇药物诱导的肝损伤是指通过某些药物或其代谢成为急性肝损伤的最常见原因,也导致了药物不良反应[1]。严重的肝损伤可能导致肝功能衰竭甚至危及生命,因此,针对药物性肝损伤寻找一种效果显

剂盒、总超氧化物歧化酶测定试剂盒、丙二醛测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶均购自南京建成生物工程研究所;IL鄄6、TNF鄄琢、IL鄄1茁ELISA试剂盒均购自美国Abcam公司。

1郾1郾3摇仪器摇酶标仪(318C+)购自上海沛欧分析仪器有限公司;可见分光光度计(V鄄1500PC)购自上海添时科学仪器有限公司;荧光显微镜(DYF鄄680)购自上海点应光学仪器有限公司。1郾2摇方法

1郾2郾1摇动物模型的建立和分组摇将大鼠随机分为6组:对照组(Control)、模型组(Model)、洋蓟素低剂洋蓟素高剂量组(Cynarin150)、N鄄乙酰半胱氨酸组每日灌服洋蓟素10ml(50、100、150mg/kg)或N鄄乙酰半胱氨酸(100mg/kg),连续28d。Model组尾静脉注射APAP(300mg/kg),每日灌服生理盐水。Control组尾静脉注射生理盐水(300mg/kg),每日1郾2郾2摇肝重/体重比摇模型建立后,称量各组大鼠体重,记为大鼠初始体重,模型建立28d后,称量各组大鼠体重,记为终末体重,计算大鼠增重。处死大鼠,取肝组织称重,计算肝重/体重比。

1郾2郾3摇HE染色摇将肝组织用10%固定并进行石蜡包埋切片,苏木素伊红染色,将石蜡切片脱蜡,蒸馏水润湿组织,核染液染色5min,水洗5s,2次后封片,在荧光显微镜下观测。并参照文献[7]方法进行肝损伤病理评分。

浆染液染色30s,水洗后,滤纸吸干,无水乙醇脱水灌服等量生理盐水[6]。

量组(Cynarin50)、洋蓟素中剂量组(Cynarin100)、(N鄄NAC)。洋蓟素组尾静脉注射APAP300mg/kg,

物诱导的急性或慢性肝损伤,如今,药物性肝损伤已

著且安全的药物是十分重要的。对乙酰氨基酚(paracetamol,APAP)常用做解热镇痛药,当以治疗剂量使用时,它是安全有效的,然而,由于过度使用由于其常见和实验简单,目前广泛用于临床建立药酸,是提取自中药菜蓟的一类咖啡酰奎宁酸类化合利胆和保肝作用通常与洋蓟素的含量有关

[5]

APAP,实验动物和人类均可诱发严重的肝损伤[2]。物性肝损伤动物模型[3]。洋蓟素又称朝蓟素,洋蓟物,具有抗氧化、抗微生物、利胆和保肝作用[4]。其前尚未有研究发现关于洋蓟素对药物性肝损伤是否的大鼠药物性肝损伤的影响。

。目

具有治疗作用。本文旨在研究洋蓟素对APAP诱导

1摇材料与方法

1郾1摇材料

1郾1郾1摇实验动物摇60只SD大鼠购自广东省医学实验动物中心,雄性,12周龄,体质量(200依10)g,许可证号:SCXK(粤)2018鄄0002,置于温控(22依1)益和光控(200lux,12h光暗循环)动物设施中常规饲1郾1郾2摇药物与主要试剂摇洋蓟素购自美国Sigma鄄98郾0%;APAP购自中国食品药品检定研究院;N鄄乙酰半胱氨酸购自上海晶都生物技术有限公司;苏木素伊红染色试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所;天门冬氨酸氨基转移酶测试盒、丙氨酸氨基转移酶测试盒、碱性磷酸酶测定试剂盒、一氧化氮测定试

淤本文受陕西省教育厅专项(18JK0246)、商洛学院校级教育教学改革研究项目(19jyjx110)和2019年陕西省大学生创新创业训练计划项目(S201911396025)资助。

作者简介:张晓文,女,硕士,副教授,主要从事中药学方面的研究,E鄄

mail:xiaowen0728@163郾com。

养7d。

Aldrich,化学式:C25H24O12,分子量:516郾45,纯度逸

1郾2郾4摇血清中ALT、AST、AKP和NO测定摇按照试剂盒说明书,采用酶标仪测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷510nm处测OD值,AKP在520nm处测OD值,NO在550nm处测OD值。

酸酶(AKP)、一氧化氮(NO)水平。ALT、AST在

1郾2郾5摇ELISA摇在4益下用50mmol/L的碳酸盐包被缓冲液溶解抗原,100滋l/孔置96孔酶标板,将抗

5min,每孔加150滋l1%BSA封闭1h,PBST洗涤3

原包被过夜,弃去包被液,用PBST洗涤3次,每次次,加入100滋l不同稀释度的血清,并加入对照样品,37益孵育2h,PBST洗涤5次,加入100滋l稀释后的HRP标记的二抗,37益孵育1h,PBST洗涤5次后显色剂显色20min,用酶标仪测定。

0郾05),Cynarin50、100、150组和N鄄NAC组体重增量显著高于Model组(P<0郾05);Model组肝重显著高于Control组(P<0郾05)。Model组肝重/体重比显著高于Control组(P<0郾05),Cynarin50、100、150组和N鄄NAC组肝重/体重比均显著低于Model组(P<2郾2摇洋蓟素改善大鼠肝组织病理损伤摇HE染色检测各组大鼠肝组织病理损伤结果如图1所示,与Control组相比,Model组肝组织肝索紊乱,炎症细胞浸润,细胞空泡样变性,病理损伤评分显著升高(P<0郾05,表2)。Cynarin50、100、150组和N鄄NAC组病理2郾3摇洋蓟素降低血清中AST、ALT、AKP、NO水平空泡样变性减少,病理损伤评分显著降低(P<0郾05)。0郾05)。

1郾2郾6摇肝匀浆中SOD、MDA和GSH测定摇按照试剂盒说明书,采用酶标仪测定总超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用可见分光光度计测定丙二醛450nm处测OD值,MDA在532nm处测OD值,1郾3摇统计学分析摇使用统计软件SPSS17郾0对实验数据进行分析。对实验数据进行正态分布分析和方差齐性分析,符合条件的选用单因素方差分析或t检验,不符合条件的选用秩和检验。GSH在412nm处测OD值。

(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量。SOD在

损伤程度较Model组有所减轻,炎症细胞浸润减少,

摇与Control组相比,Model组血清中AST、ALT、AKP、NO水平显著降低(P<0郾05),Cynarin50、100、均显著低于Model组(P<0郾05)。见表3。

2摇结果

2郾1摇洋蓟素降低大鼠肝重/体重比摇检测各组大鼠体重和肝重结果如表1所示。Model组终末体重显著高于Control组(P<0郾05),Cynarin50、100、150组和N鄄NAC组终末体重均显著高于Model组(P<0郾05);Model组体重增量显著低于Control组(P<

表1摇各组大鼠体重和肝重测定结果(x依s,n=10)

150组和N鄄NAC组血清中AST、ALT、AKP、NO水平2郾4摇洋蓟素下调血清炎症因子TNF鄄琢、IL鄄6、IL鄄1茁水平摇Model组TNF鄄琢、IL鄄6、IL鄄1茁水平显著高于NAC组TNF鄄琢、IL鄄6、IL鄄1茁水平均显著低于Model组(P<0郾05)。见表4。

Control组(P<0郾05),Cynarin50、100、150组和N鄄

Tab.1摇Resultsofweightandliverweightofratsineachgroup(x依s,n=10)

ControlCynarinCynarinCynarinN鄄NACModelGroups

Dose(mg/kg)Initialweight(g)

210郾5依9郾3214郾3依6郾8204郾9依9郾8208郾5依7郾9206郾7依6郾6211郾6依10郾2

Terminalweight(g)351郾6依31郾2245郾4依9郾31)

Bodyweightincrement(g)

140郾0依19郾531郾8依10郾31)55郾6依7郾82)110郾4依5郾42)100郾0依3郾22)92郾0依10郾32)

Liverweight(g)10郾8依0郾81)10郾4依0郾910郾1依0郾710郾2依0郾510郾5依0郾59郾8依0郾3

Liverweight/bodyweight

0郾028依0郾0040郾045依0郾0091)0郾032依0郾0022)0郾033依0郾0032)0郾031依0郾0032)0郾033依0郾0032)

100150100

50263郾0依28郾32)308郾2依32郾02)321郾8依35郾52)307郾2依10郾42)

Note:ComparedwithControlgroup,1)P<0郾05;comparedwithModelgroup,2)P<0郾05郾

表2摇各组大鼠肝组织损伤病理评分(x依s,n=10)

Tab.2摇Pathologicalscoresoflivertissueinjuryofratsin

eachgroup(x依s,n=10)

ControlCynarinCynarinCynarinN鄄NACModelGroups

Dose(mg/kg)

Score3郾5依0郾21)3郾1依0郾32)1郾9依0郾22)1郾5依0郾32)1郾7依0郾32)

100150100

图1摇HE染色Fig.1摇HEstaining

Note:ComparedwithControlgroup,1)P<0郾05;comparedwithModel

group,2)P<0郾05郾

表3摇各组大鼠血清中的各项指标测定结果(x依s,n=10)

Tab.3摇Resultsofserumindexesineachgroupofrats(x依s,n=10)

ControlCynarinCynarinCynarinN鄄NACModelGroups

Dose(mg/kg)

47郾5依5郾3AST(U/L)

29郾6依4郾2ALT(U/L)

10郾0依2郾5AKP(U/L)

39郾8依0郾3NO(滋mol/L)

100150100

375郾3依36郾01)204郾9依21郾42)165郾6依18郾22)120郾5依14郾32)139郾7依15郾72)

155郾4依17郾41)105郾0依8郾72)68郾2依7郾02)41郾8依5郾92)60郾2依10郾42)

21郾8依8郾31)18郾6依7郾82)12郾0依4郾32)10郾4依4郾42)11郾0依3郾22)

90郾8依8郾51)75郾4依9郾12)60郾1依7郾72)50郾2依5郾32)56郾5依5郾42)

Note:ComparedwithControlgroup,1)P<0郾05;comparedwithModelgroup,2)P<0郾05郾

表4摇血清炎症因子水平(x依s,n=10)

Tab.4摇Serumlevelsofinflammatorycytokines(x依s,n=10)

ControlModel

GroupsDose(mg/kg)TNF鄄琢(pg/ml)IL鄄6(pg/ml)IL鄄1茁(pg/ml)

119郾3依20郾51)580郾1依59郾41)636郾6依郾51)65郾6依4郾52)53郾9依6郾4

性肝损伤仍缺乏简便、客观、特异的诊断指标和特异的治疗方法。APAP是研究最多的药物之一,导致可预测的药物性肝损伤,其肝毒性呈剂量依赖性[9]。到目前为止,N鄄NAC是治疗APAP诱导的药患者通常需要进行肝移植[10]。已有研究证明洋蓟素具有保肝活性,本文研究发现,洋蓟素可降低大鼠肝组织病理损伤程度,降低大鼠肝重/体重比。

药物性肝损伤一般表现为肝脏生化指标水平升高,血清中ALT、AST、AKP属于药物性肝损伤的生物标志物[11]。NO是肝细胞氧化还原生物学中至关重要的活性氮物种,在APAP中毒时,肝组织中NO的合成增加[12]。Huang等[13]研究发现金丝小枣通过降低AST,ALT和AKP水平保持肝细胞的结构完整性并减轻APAP诱导的肝损伤。尹学哲等[14]研究发现草苁蓉不同溶剂萃取物通过降低一氧化氮合酶活性和NO水平对APAP诱导的小鼠急性肝损伤发挥保护作用。本研究发现,洋蓟素可降低AST、ALT、AKP水平的作用。

在APAP诱导的急性肝损伤下,活化的肝巨噬细物性肝损伤最重要的疗法。然而,如果不及时治疗,

47郾1依5郾3149郾1依12郾5197郾2依14郾3

CynarinCynarinCynarinN鄄NAC

100150100

50436郾3依33郾82)563郾8依55郾62)382郾8依35郾0

40郾5依6郾32)59郾7依6郾72)

314郾8依25郾92)210郾4依24郾42)360郾2依10郾42)161郾0依13郾22)

379郾3依38郾1

Note:ComparedwithControlgroup,1)P<0郾05;comparedwithModel

group,2)P<0郾05郾

表5摇各组大鼠肝组织SOD、MDA和GSH水平(x依s,n=10)Tab.5摇LevelsofSOD,MDAandGSHinlivertissuesof

ratsineachgroup(x依s,n=10)

GroupsControlCynarinCynarinCynarinN鄄NACModel

(mg/kg)(U/mgpro)

247郾1依30郾3郾3依10郾51)

2)2)

DoseSOD

(nmol/mgpro)18郾1依2郾41)16郾3依2郾82)12郾8依1郾0

2)2)

MDA

2郾1依0郾5157郾2依14郾3

(U/mgpro)

GSH

100150100

50165郾6依24郾52)193郾9依16郾4230郾5依26郾3

56郾6依郾51)73郾8依55郾62)99郾3依38郾1

Note:ComparedwithControlgroup,1)P<0郾05;comparedwithModel

group,2)P<0郾05郾

229郾7依16郾72)15郾2依1郾42)

8郾8依1郾9112郾4依24郾4

130郾0依13郾22)

1茁,这些促炎细胞因子能增强炎症反应和增加免疫细胞,如单核细胞和中性粒细胞的流入[15]。本研究发现,洋蓟素可降低TNF鄄琢、IL6和IL鄄1茁水平。

过量的乙酰氨基酚转化为NAPQI后,与组织大分子共价结合并氧化脂质,导致肝毒性,而脂质过氧化会导致膜破裂,导致膜完整性丧失和微粒体酶渗漏。GSH在线粒体抗氧化防御中起关键作用,且NAPQI诱导的耗竭是APAP诱导的毒性中的重要事件。MDA是脂质过氧的终产物通常用作氧化应激的生物指示剂,SOD是保护活性氧反应的重要酶,在APAP诱导期间,SOD活性较低[16]。Yan等[17]研究发现膳食琢鄄Mangostin通过增加GSH含量,降低

胞将释放各种促炎细胞因子,包括TNF鄄琢、IL6和IL鄄

2郾5摇洋蓟素对大鼠肝组织中SOD、GSH、MDA含量的影响摇与Control组相比较,Model组SOD、GSH显著降低(P<0郾05),MDA含量显著升高(P<0郾05)。与Model组相比较,Cynarin50、100、150组MDA含量显著降低(P<0郾05)。见表5。

和N鄄NAC组SOD、GSH含量显著升高(P<0郾05),

3摇讨论

药物性肝损伤是指由各种处方药或非处方药诱发的肝损伤,包括小分子化学药物、生物制剂、中药、天然药物、保健品和膳食补充剂等[8]。目前对药物

MDA含量对APAP诱导的肝毒性具有保护作用。

2017,33(12):1761鄄17郾

Liu等[18]研究发现马齿苋乙醇提取物通过增加GSH的肝损伤。本研究发现,洋蓟素有增加SOD、GSH含量,降低MDA含量的作用。

水平、SOD活性,降低MDA含量改善对APAP诱导

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综上所述,在对APAP诱导的药物性肝损伤中,洋蓟素可改善肝组织病理损伤程度,降低肝脏生化指标水平、血清炎症因子水平,改善氧化应激水平。本文研究结果阐明了洋蓟素治疗药物性肝损伤的潜力,但具体的分子机制仍需进一步实验研究。

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[收稿2019鄄10鄄14摇修回2019鄄11鄄14]

(编辑摇苗摇磊)

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