１３４ 中国药事２００９年第２３卷第２期 ＨＰＬＣ法测定黄柏不同炮制品中小檗碱的含量 时维静 ，陈文成，谭志静（安徽科技学院，凤阳２３３１００） 摘要： 目的考察不同炮制方法对黄柏中小檗碱含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱 含量。色谱柱ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ｃ１８；流动相为乙腈一０．１ 磷酸溶液（５Ｏ：５０）；流速为１．ＯｍＬ・ｍｉｎ－ ；柱温 为室温；检测波长为２６５ｎｍ；进样量为２Ｏ Ｌ。结果在０．４６～４．６ｔ＊ｇ（ｒ—Ｏ．９９９８，）范围内线性关系良好。 结论结果表明黄柏丝的小檗碱含量最高。 关键词： 黄柏；炮制；提取工艺；ＨＰＬＣ 中图分类号：Ｒ９２７．２；Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—７７７７（２００９）０２—０１３４－０３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｉｎ Ｃｏｒｔｅｘ Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ ｗｉｔｈ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｂｙ ＨＰＬＣ Ｓｈｉ Ｗｅｉｊ ｉｎｇ ，Ｃｈｅｎ Ｗｅｎｃｈｅｎｇ ａｎｄ Ｔａｎ Ｚｈｉｊ ｉｎｇ（Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ ２３３１００） ＡＢＳＴＲＡＣｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｏｎ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｃｏｒｔｅｘ Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｂｙ ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｂｅｉｎｇ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ￣０．１ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ（５Ｏ： ５Ｏ），ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ｍＬ・ｍｉｎ－ ，ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ｒｏｏｍ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２６５ｎｍ，ａｎｄ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ ２０ｇ．Ｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ｌｉｎｅａｒ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．４６～ ４．６ｔｚｇ（ｒ一０．９９９８）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｏｒｔｅｘ Ｐｈｅ｝ｅｏｄｅｎｄｒｉ ｓｉｌｋ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ： Ｃｏｒｔｅｘ Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ；ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ；ＨＰＬＣ 黄柏为芸香科植物黄皮树Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ 法、超声提取法等＿４］。本课题预试验研究表明，采 ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥树皮。具有清热燥湿、泻 用酸水浸渍法可有效的将黄柏中的小檗碱提取出 火除蒸、解毒疗疮之功效［１］。现代药理学研究表 来。本试验采用酸水浸渍法提取黄柏不同炮制品， 明：黄柏在降血糖、降血压、抗菌、抗病毒、抗 ＨＰＬＣ测定含量，研究不同炮制方法对黄柏中小檗 炎、解热、抗癌、抗溃疡、抗氧化等多方面功效显 碱含量影响。 著，有着良好的开发前景Ｉ２］。其主要成分是小檗 １仪器与试药 碱、药根碱和巴马汀等生物碱类。盐酸小檗碱 １．１仪器 （ＣｚｏＨ ｓＣＬＮＯ４）是评价黄柏质量的基本指标，按 Ｗａｔｅｒｓ １５２５型高效液相色谱仪（２４８７ ＤＡＤ 《中国药典》２００５年版规定其生品含量不少于 紫外检测器，Ｂｒｅｅｚｅ色谱工作站，美国Ｗａｔｅｒｓ）； ３．Ｏ 引。 ＴＵ－１８１０ＳＰＣ紫外分光光度计（北京普析通用有限 《中国药典》２００５年版中，黄柏主要有三种炮 公司）；ＢＳ２１Ｓ精密电子天平（德国赛多利斯天平 制品，黄柏丝、盐黄柏、黄柏炭。在其有效成分提 有限公司）；定量毛细管（美国Ｄｒｕｍｍｏｎｄ）；ＫＱ－２５ｏ 取方法上主要有酸水浸渍法、石灰乳法、乙醇提取 型超声波清洗器（合肥金尼克机械制造有限公司）。 基金项目：安徽省科技厅科技攻关重点项目资助（编号０７０１０３００１５３）；安徽省自然科学研究计划项目资助（编号ＫＪ２ｏＯ８Ｂ２Ｏ８）；蚌埠市科 技局产学研资助项目（２００７）。 通讯作者：时维静，教授，硕士生导师；研究方向：中药复方的应用研究；Ｔｅｌ：（０５５）６７３３１１６；Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｉｗｊ８０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 中国药事２００９年第２３卷第２期 １．２试药 １３５ 试品溶液。 黄柏（芸香科植物黄皮树Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｓｃｈｎｅｉｄ．的干燥去栓皮的树皮，产地：吉 ２．３．３对照品溶液制备精密称取在１００℃干燥 ５ｈ的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每 １．ＯｒａＬ含０．４６ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。 ２．３．４线性关系考察精密吸取对照品溶液０．１， ０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ分别置２ｍＬ的量瓶 中，加甲醇定容至刻度，摇匀。配置成０．０２３， ０．０４６，０．０９２，０．１３８，０．１８４，０．２３ｍｇ・ｍＬ 的 林，涡阳县和堂中药饮片有限责任公司，药品生产 许可证号：皖Ｙ２００３０００１，批号２００６０３２２）；盐酸 小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号： １１０７１３—２００２０８）；乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其 它试剂均为分析纯。 ２方法与结果 系列浓度，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积 将干燥的黄柏皮除去杂质，喷淋 取食盐４ｇ加入１５０ｍＬ的纯净水 ２．１黄柏不同炮制品的制备ｒ－。］ ２．１．１黄柏丝２．１．２盐黄柏清水，润透，切丝，干燥。 积分值为纵坐标，以盐酸小檗碱进样量为横坐标作 标准曲线，得回归方程： ｙ一４×１０ Ｘ＋１．９９２０７×１０ ｒ一０．９９９８ 在０．４６～４．６ ｇ范围线性关系良好。 ２．３．５ 精密度试验 吸取盐酸小檗碱 制成盐水。再取黄柏丝ｌＯＯｇ放入盐水中拌匀，稍 闷，待盐水被吸尽后，置入炒制容器内，用文火加 热，炒干，取出放凉，筛去碎屑。 ２．１．３黄柏炭取ｌＯＯｇ干燥的黄柏丝，置热锅 （０．２３ｍｇ・ｍＬ ）对照品溶液，按上述色谱条件重 复进样６次，峰面积ＲＳＤ为０．３１ 。 ２．３．６重复性试验取黄柏丝按样品测定项下操 内，用武火炒至表面焦黑色，内部焦黄色时，喷洒 清水少许，熄灭火星，取出，晾干，筛去碎屑。 ２．２黄柏的酸水浸渍法提取＿＿５］ 作，平均测定６份，结果盐酸小檗碱平均含量为 ３０．１２ｍｇ・ｇ－ ，ＲＳＤ为０．４３ 。 ２．３．７稳定性试验吸取新配制的黄柏丝样品溶 称取黄柏３种炮制品粗粉各ｌＯｇ，分别用 ０．５ ９／６硫酸溶液１００ｍＬ浸泡２４ｈ，吸取上清液，药 渣再用０．５ 硫酸溶液浸泡１２ｈ，吸取上清液。将 两次上清液合并，加入石灰乳调ｐＨ８～９，过滤。 滤液中加入１０ ＮａＣ１，搅拌溶解，冷藏过夜，取 沉淀加热水溶解，趁热过滤，滤液加浓盐酸调 ｐｉｌｌｓ２，冷藏过夜，取沉淀，用少量蒸馏水洗至 ｐＨ为５，然后定容到１０ｍＬ量瓶中，做为供试品 溶液，备用。 ２．３小檗碱含量测定 液，每隔２ｈ进样２０ｔ￣Ｌ，测定２４ｈ，测得峰面积并 计算，结果ＲＳＤ为０．５７ ９／６（ 一１０），表明样品溶 液在２４ｈ内测定结果稳定。 ２．３．８ 回收率试验精密称取已知含量样品适量， 分别精密加人盐酸小檗碱对照品溶液１．ＯｍＬ，按 上述方法测定，计算回收率。结果见表１。 表１回收率测定结果（ 一５） 样品量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 ＲＳＤ （ｎａｇ）１．０４２ １．Ｏ６５ １．０６８ １．０７２ １．０９１ （ｎａｇ）０．４６ ０．４６ ０．４６ Ｏ．４６ ｎ．４ （ｎａｇ） １．５０４ １．５１４ １．５２１ １＿５２４ １．５５ （ ） １００．１３ ９９．２８ ９９．５４ ９９．４８ １ｎｎ．３ （ ） （ ） ２．３．１色谱条件色谱柱：ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ｃ ８柱 ９９．７５ ０．４５ （４．６ｒａｍＸ ２５０ｍｍ，５ ｍ）；检测波长：２６５ｎｍ；流 动相为乙腈一０．１ 磷酸溶液（５０：５０）（每ｌＯＯｍＬ加 十二烷基磺酸钠０．１ｇ）［。 ；流速为１．０ｍＬ・ｒａｉｎ－ ； 柱温为室温；进样量２０ｔ￣Ｌ。理论板数以盐酸小檗 碱峰计算不低于４０００。 ２．３．９样品的测定分别吸取对照品溶液和供试 品溶液，在上述色谱条件下注入高效液相色谱仪 ２．３．２供试品溶液制备精密吸取“２．２”项下各 ２０ Ｌ，测得吸收峰面积积分值，按回归方程计算 小檗碱的含量。色谱图见图１，结果见表２。 种供试品液１．ＯｒａＬ，用甲醇定容到５０ｍＬ，即得供 ２．００ ４ ６ｏ ６．００ ８．００ ｌｏ￣ｏｏ ｌ２ Ｏ０ Ｙｍｉｎ ２ Ｏ０ ４ Ｏ０ ６砷８．００ １０：００ １２ Ｏ０ｆｆｍｉｎ ２ Ｏ０ ４ Ｏ０ ６ Ｏ０ ８．００ １０ Ｏ０ １２ Ｏ０ Ｕｍｉｎ ２ Ｏ０ ４ Ｏ０ ６ Ｏ０ ０．００ １０￣００ １２ ００ Ｕｍｉｎ ａ．对照品；ｂ．黄柏丝；ｃ盐黄柏；ｄ．黄柏炭；１盐酸小檗碱。 图１对照品与炮制品的ＨＰＬＣ色谱图 １３６ 表２黄柏不同炮制品的小檗碱含量 中国药事２００９年第２３卷第２期 檗碱的提取率最高，试验采用酸水浸提处理样品。 本项试验表明，不同的炮制方法对黄柏中小檗 碱含量有很大影响。三种炮制品中以黄柏丝的小檗 碱含量最高，盐黄柏次之，黄柏炭最低。临床应用 黄柏，清热燥湿解毒多生用；泻火除蒸退热多盐水 从表２可以看出，黄柏丝的小檗碱含量符合药 炙用；止血多炒炭用。黄柏中除含有多种生物碱 典的规定，而通过炮制小檗碱含量有不同程度的降 低，黄柏炒炭后小檗碱含量甚微。 ３讨论 外，还有黄柏酮、黄柏内酯等。黄柏不同炮制对其 他成分的影响还有待进一步研究［９ 。 参考文献： ［１］ 雷载权．中药学［Ｍ］．上海，上海科学技术出版社， １９９７：６２—６５． 炮制是中医临床用药的一个特点，也是中医药 宝库的重要组成部分。加工炮制是否得法对中药药 效影响很大Ｉ６］。陈嘉谟在《本草蒙筌》中云：“制 Ｅ２］ 侯小涛，戴航，周江煜．黄柏的药理研究进展［Ｊ］．时珍 国医国药，２００７，１８（２）：２５２—２５４． ［３］ 中国药典［ｓ］．一部，２００５：２１４． 药贵在适中，不及则功效难求，太过则气味反失 ……酒制升提，姜制发散，入盐走肾，蜜制甘缓。” 中药经过炮制后之所以临床疗效发生改变是因为其 化学成分发生一系列的变化：有的可能是量变，一 ［４］ 聂继红，王萍，武琳．黄芩、黄柏提取工艺的研究概述 【Ｊ］．中医药，２００５，２３（１）：６４—６６． 些成分含量增加了，另一些成分含量减少或消失 了；也有的可能是质变，即产生新的化合物。因 此，研究中药炮制前后理化性质的变化以及同种中 药不同炮制品的理化性质的差异，对探讨中药炮制 Ｅ５］ 尹蓉莉，杨军宣，李化．黄柏中盐酸小檗碱提取实验方法的 改进［Ｊ］．基层中药杂志，２０００，１４（６）：２７—２９． ［６］ 俞明义．中药饮片质量与临床疗效［Ｊ］．浙江中西医结合 杂志，２００５，１５（４）：２５５—２５６． ［７］ 朱悦，丁安伟．炮制对中药材化学成分的影响［Ｊ］．中国 药业，２００７，１６（６）：５９—６０． 作用和原理具有很重要的意义 ７ ］。 盐酸小檗碱是生物碱类，在水和醇中的溶解度 Ｅ８］ 唐益华．炮制对中药材成分影响的研究［Ｊ］．中国药事， ２００２，１６（４）：２４９ ２５２． 不大，用酸水浸提是将盐酸小檗碱通过与酸化合生 成一种较易溶于水的生物碱盐，待其从药材中溶解 出时，将其碱化再转化成盐酸小檗碱，可使小檗碱 ［９］ 廉莲，贾天柱．黄柏及其炮制品对小鼠及大鼠胃肠功能的影 响＿Ｊ］．中华中医药学刊，２００８，２６（３）：４９９ ４５１． 的提取率提高［５］。《中国药典》２００５年版采用超声 法提取样品，操作简便，省时。预试验酸水浸提小 ［１０］ 刘传玲，董丽萍，丛永壮．ＨＰＬＣ法测定黄柏中小檗碱的 含量［Ｊ］．中国药事，２００５，１９（６）：３８３—３８４． 国家食品药品监督管理局要求停止生产、销售和使用盐酸芬 氟拉明原料药和制剂 国家药品不良反应监测中心的监测数据表明，使用盐酸芬氟拉明可引起心脏瓣膜损害、肺动脉高压、心力衰竭、心动 过速、心慌、胸闷、血尿、皮疹、恶心、头晕等严重不良反应。国家食品药品监督管理局组织专家对该品种进行了综合评 价，认为：国内外监测和研究资料表明，该药品用于减肥风险大于利益。 为保障公众用药安全，根据《药品管理法》和《药品管理法实施条例》，决定停止盐酸芬氟拉明原料药和制剂在我国的 生产、销售和使用，撤销其批准证明文件。已上市销售的药品由生产企业负责召回，在所在地药品监督管理部门监督下销 毁或者处理。 盐酸芬氟拉明用于单纯性肥胖及患有糖尿病、高血压、心血管疾患、焦虑症的肥胖患者。 ２００９—０１—０９发布
