用铅电极测定螺旋藻中蛋白质的含量

瞎：瓤¨　：　第量年　６　掰胄　用铅电极测定螺旋藻中蛋白质的含量　＼ｌ，　，二＝二　、１／１、　一————一　／｝　／　ｌ，ｖ　－／、　●／　／　ｆ　７　（云南省药品检验所　昆明６　５００１１　）　，卜　‘ｆ＞　！－　摘要文章介绍了甩铅离子电糨问接捌定我省健字号药品艟普瑞驶囊中蛋自质古量爵方法，竞最了　前　言　螺旋藻（Ｓｐｉｒｉａ）属于小球藻的一种，其主要成分为蛋白质，已被开发为健字号药　品。标准方法［１］中对蛋白质含量的测定采用克氏定氨法。该法对费时、耗试剂、安全性等　问题均难克服。如果改用电极法，不仅解决上述问题，而且测定结果与克氏定氨法一致。　电极法的原理是ｔ蛋白质在一定条件下能与铅离子生成络台物沉淀，向试液中加入过　量Ｐｂ“，用铅电极作为指示电极，以草酿钠标准液滴定剩余的Ｐｂ“。实验证明，一个Ｐｂ　恰　与蛋白质中的两个＞Ｎ一基相配对，从而奠定了奉方法的基础。　实验部分　一№¨　、主耍使■夏试搁　６　１．仪器ＰＨｓ一３　Ｃ酸度计（上海雷磁仪器厂）’ＤＦ－－８３０型数字式万用表，超声波　清洗器（ＣＸ－－２５０），电磁搅拌器Ｉ铅离子电极（江苏电分析仪器广）Ｉ　２１７型甘汞电极　（内充０．ＩＭＮａＮＯ｝的琼脂溶液）。　２．试剂０．５ｍｏｌ＇／ＬＰｂ（ＮＯ｝）２及０．１ｍｏｌ／ＬＮａＮＯ￣溶液，Ｏ．０２ｍｏｌ／ＬＮａ，Ｃｓ０＇４标准　液及无水乙醇（均为ＡＲ级），蒸馏水等。０．０２ｍ０１／ＬＮａ　ＣｔＯ‘标准液：称取一定量舶　Ｎａ　ＣｊＯ．加水定窑到ｌＯ００ｒａｌ，精密吸取一定量按中国药典［２］标定草酸滴定液操作。　＝、实验方涪　取适量测试样品，在乳钵中研细。精确称取约０．３５ｇ，加入５０ｍｌ容量瓶中。加水浸润　后再加水至刻度，密塞并摇匀。置超声波清洗器中超声提取１５分钟以上　离心精确吸取上　清液５　ｍ１于２５ｍｌ量瓶中，加入０．５ｍｏｌ／Ｌ的Ｐｂ（ＮＯ￣），液２．ｏｒａｌ，摇匀，再加入ｏ・ｌｍｏｌ／Ｌ　ＮａＮＯ　ｓ溶液至刻度，摇匀。置沸水浴中加热１２分钟。取出，冷至室温，过滤，弃去初滤　渡，精确吸取续滤液２ｍｌ于１００ｍｌ烧杯中。加入无水乙醇８ｍ１，插入电极，在电磁搅拌　．　＜ｒ，　维普资讯 http://www.cqvip.com

２船　范亚刚等ｔ用帮电楹测定篡麓藻中蛋白质的古量　１３３　下，用Ｏ．０２ｍｏｌ／ＬＮａａＣ２０，］￣定至终点。由＝阶导数求算准确毫升数，计算含量。　同法作空白对照实验，并将结果减去９．９ｍｇ即得（参见说明３）。　结果与讨论　一、蠢件实验　ｉ．Ｐｂ（ＮＯＤ　２溶液用量的选择固定其它条件，按实验方法，精密称取经克氏定氨测　得已知含量的试样（下同）０．３５ｇ　５份，分　别加入０．￥ｍｏｌ／Ｌ时Ｐｂ（ＮＯ；）确　０．５、１．０、　．５、２．０、２．５ｍ１进行沉淀反应，分剐测得各　含量结果，以ｍ１一Ｃ作图（图ｉ），由图看出，　随着Ｐｂ”量增加，曲线逐渐趋于平缓，当加　封２．５ｍｉ时沉淀完全，为取量方便，可适当　提高Ｐｂ（ＮＯ；）２浓度而定为取２　ｍｌ即可。　２．ｐＨ值的影响固定其它条件，根据电　投适应的ｐＨ值范围，将提取液的ｐＨ分别调　节至３．５、４．０、４．５，５．０、５．５～６．８８后，各　加入等量的Ｐｂ“进行沉淀反应，按测定方　法，测得含氨量与ｐＨ的关系曲线图（见图　２），当ｐＨ为５．５～６．８时，反应曲线趋于　平缓状态，即与已知含氨量一致，说明反应　业已完全。但在正常情况下，试样的ｐＨ均保　持在５．５～６．５Ｙ－间，故测定时，无须调节ｐＨ　或加入特定缓冲液。应注意的是，ｐＨ值不　得大于７．０，否则将产生Ｐｂ（ＯＨ）２沉淀，严　重影响测定结果。　３．浸提时间的确定要将小球藻细胞内　的蛋白质浸出于水溶液中，最理想的方法是　１　辽　矬　臣　时间／分　图８　浸提时同的确定　砑　差　图４温度的ｌ髫响　厂维普资讯 http://www.cqvip.com

维普资讯 http://www.cqvip.com