猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学

・ｌ０．　专题・母猪繁殖障碍综合征　ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤ　ＰｏＵＬＴＲＹｌＮＤＵｓＴＲＹＮｏ．２２７　垂体后叶素。催产素等促进子宫收缩　的药物。　猪繁殖与呼吸综合征病毒的　３防治措施　分子生物学　引起母猪繁殖障碍病的原因多样　而复杂，所以对本病的防治常常要运　周盛华１２．　崔尚金：　用综合措施。　（１．东北农业大学动物医学院，黑龙江　哈尔滨　１５００３０；２．中国农科院哈尔滨兽医　３．１把好引种检疫关　研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病学研究室１　异地引种一定要到动物防疫监督　机构办理检疫审批手续，引种前要认　中图分类号￣￥８５２．６５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８—０４１４（２００８）０３—００１０—０３　真了解供种单位的免疫程序和疫情情　摘　要　猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一　况，严禁到疫区引种。引进后经当地动　种传染病。目前在世界各地均有发生和流行。是危害养猪业最为严重的疾病之一。　物防疫监督机构检疫合格，隔离观察２　ＰＲＲＳＶ也是造成２ｏｏ６年以来我国猪高热病的主要病原。本文对猪繁殖与呼吸综合　周并进行相应的实验室检测结果为阴　征病毒的病毒形态和理化特性、基因组结构、病毒蛋白及功能．基因组的变异．分子　性，再接种有关疫苗产生免疫力后方　生物学诊断等五个方面的研究进展作了综述。　可入场饲养。　关键词　猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组编码蛋白基因变异分子生　３．２加强饲养管理　物学诊断　改善猪舍的卫生条件。保持舍内　Ｔｈｅ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐｏｒｃｉｎｅ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　空气流通和注意舍内温湿度的调节。　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　Ｖｉｒｕｓ　根据不同的阶段逐渐调整日粮中的维　生素、矿物质、能量饲料等营养成分的　ＺＨＯＵ　Ｓｈｅｎｇ－ｈｕａ。，ＣＵＩ　Ｓｈａｎｇ－ｊｉｎ　含量．保证机体所需营养的供给。　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ　Ａ　ｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｈａｒｂｉｎ　３．３制定合理的免疫程序　１５００３０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｗｉｎｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｋｅｙ　Ｌｉｂｒａｒｙ　ｏｆ　规模化养猪场应每年至少进行１　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｄｌｏｇｙ）　次免疫监测，以便随时了解和掌握本　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｒｃｉｎｅ　Ｒｅｐｒｏｄｕｅｔｉｖｅ　ａｎｄ　Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｉｓ　ａ　ｎｅｗｌｙ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　场猪体中相关抗体水平。确定免疫时　ｄｉｓｅａｓｅ，ｗｈｉｃｈ　ｈａｄ　ｓｐｒｅａｄ　ｗｉｄｅｌｙ　ａｎｄ　ｃａｕｓｅｄ　ｈｕｇｅ　ｌｏｓｓ　ｔｏ　ｗｏｒｄ　ｐｉｇ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ．ＰＲＲＳＶ　Ｗａｓ　ｔｈｅ　间，适时进行预防接种。并且根据疾病　ｍａｊｏｒ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　Ａ　Ｈｉｇｈ　Ｆｅｖｅｒ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＨＦＳ）ｉｎ　ｓｗｉｎｅ　ｏｕｔｂｒｅａｋ　ｉｎ　２００６．Ｔｈｅ　ａｒｔｉｃｌｅ　的发生特点定期进行药物预防。　ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｎ　ｖｉｒａｌ　ｍｏｒｐｈｏｕｓ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｇｅｎｏｍｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｖｉｒａｌ　３．４查清病因。合理用药．　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｄｉａｇａａｏｓｉｓ．　一旦发现可疑病猪　要立即隔离。　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ（ＰＲＲＳＶ）；ｇｅｎｏｍｅ；ｅｎｃｏｄｅｎ　本场技术人员不能确诊时．应迅速采　ｐｒｏｔｅｉｎ；ｇｅｎｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｈｌｏ￣ｏｓｉｅａｔ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　集病料或将未经治疗的病猪送兽医部　门进行确诊。对症用药，才能收到事半　猪繁殖与呼吸综合征（Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏ－　１９８７年首次在北美发现【ｌｉ．之后在世　功倍的防治效果。严禁未弄清病症．乱　ｄｕｃｔｉｖｅ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ．ＰＲＲＳ）是由猪繁殖与呼　界范围内迅速传播．给养猪业造成极　用、滥用药物，这样不仅造成极大药物　吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）引起的一种传染病，　大的经济损失。郭宝请［２１等首次在国　浪费，而且还会贻误治疗时机，造成较　以引起母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸　内疑似ＰＲＲＳＶ感染的猪群中分离出　大的经济损失。　道症状及高死亡率为主要特征。该病于　ＰＲＲＳＶ．从而证明了该病毒在我国的　３．５制定严格的兽医卫生制度　存在。目前，ＰＲＲＳＶ也成为我国最重　食槽等用具要经常清洗、消毒。猪　收稿日期：２００８—０１—３１　要猪传染病原之一。２００６年夏季我国　舍要定期消毒，对病死猪要做销毁处　理。此外要搞好环境卫生．做好灭蚊　养，预（防），隔（离），治（疗），消（毒），补（营　与防制．畜牧兽医科技信息．２００４（３）：２０￣２２　蝇、灭鼠等工作。　养），处（理）”等综合措施　，防止一切由非　【２］段宏安摘译自ＪＡＶＭＡ．病毒引起的母猪　引起母猪繁殖障碍综合征的因素　传染性病因引起的母猪繁殖障碍综合征的　繁殖障碍．黑龙江畜牧兽医，１９９９（５）：３２～３３　很多。一旦发病很难完全治疗。常常在　发生：有效的疫苗免疫接种和加强饲养管　【３］蔡宝祥．繁殖与呼吸综合症．家畜传染病　学，北京：中国农业出版社，２００１：２１１－２１３　治疗后母猪繁殖力也会下降。甚至丧　理是控制由传染性病因引起的母猪繁殖综　合征发生的关键。从而全面的降低各种因　【４］蔡宝祥．猪流行性乙型脑炎．养猪，１９９８　失。近年来由传染因素。尤其是病毒性　（３）：１５　繁殖障碍病严重威胁着养猪业的发　素对母猪繁殖造成的影响，提高经济效益。　【５】张士田．猪瘟的流行新特点和免疫失败　展，造成严重的经济损失。因此实行饲　参考文献　的原因及解决办法．猪业科学，２００５（８）：ｌ１一ｌ２　养管理规范化　科学化，　防疫措施制度　【６］宋克磊，关于母猪繁殖障碍类疾病的防　化、经常化，综合运用“（引）种，（饲）　［１】孔令迭．弓Ｉ起母猪繁殖障碍综合症的病因分析　治．养猪．１９９８（３）：４４—４７　维普资讯 http://www.cqvip.com 南方诸省爆发猪无名高热病，损失严　顺序依次为５’一ＯＲＦｌａ—ＯＲＦｌｂ—ＯＲＦ（２—６１—　ＧＰ２肽链内含有二硫键，通过二硫键　重，持续流行，造成全国十几个省发生　０ＲＦ７—３’。病毒基因组的每个读码框和相　前ＰＲＲＳ老疫区并未消灭，新疫区又　不断发生，且由于寄发病的增多，使　猪场防疫形势十分严峻。　特异性病毒蛋白，其中ＯＲＦ１（包括ＯＲＦｌａ．　ＯＲＦｌｂ）位于基因组的５’端，ＯＲＦ１是最大　的一个阅读框，长约１２　ｋｂ，约占病毒基因　组的８Ｏ％。ＯＲＦｌａ编码起始区的核心序列　可和其它结构蛋白形成同源或异源多　疫情，其中ＰＲＲＳ是最主要病原［　。目．　邻的读码框有部分重叠，每一阅读框编码　聚体，其糖基化位点被Ｎ一聚糖符合物　覆盖。ＧＰ２蛋白表面有１个抗原位点．　其周围有１个ＶＳＲＲ［ＹＱ基元，可与ＧＰ５　蛋白Ｂ细胞抗原位点构成二级结构　ＧＰ２蛋白免疫性很差，在病毒中含量　１　病毒形态和理化特性　５’ＵＡＡＣＣＡＵＣ３’，高度保守。在ＯＲＦｌａ上游　较少，很难从感染的细胞裂解液或纯　ＰＲＲＳＶ属于第十次国际病毒大　是长约１８９个核苷酸的非编码区ｆＮｏｎ—　化的病毒粒子中得到分离鉴定［１１］。　会上新设立的动脉炎病毒科、动脉炎　Ｃｏｄｉｎｇ　Ｒｅｇｉｏｎ　ＮＣ　Ｒ１，高度保守，在两种基　病毒属的病毒［４１。ＰＲＲＳＶ为不分节段，　因型的，毒株中同源性高达９９％。ＯＲＦｌａ和　有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒。ＰＲＲＳＶ　ＯＲＦｌｂ重叠１６个核苷酸。ＯＲＦｌｂ具有４个结　病毒粒子呈球形，直径４５—６５　ｎｍ，二　构域：（１）聚合酶元序列；（２）富含半胱氨酸　面体对称，核衣壳直径约２５—３５　ｎｍ，　和组氨酸的锌指区；（３）蜗牛酶基元序列：　上有长约５　ｎｍ的突起，外绕一脂质双　（４）功能不明的保守区域。其余的阅读框位　层膜，易被脂溶剂如氯仿、乙醚等溶　于基因组的３’端，约占３．５　ｋｂ．是公认的结　解，在氯化铯和蔗糖密度梯度中浮力　构基因。０ＲＦ２—０ＲＦ７为编码病毒结构蛋　密度分别为１．１３—１．１９　ｇ／ｃｍ　和１．１８—　白，其中ＯＲＦ２—６编码与病毒膜有关的蛋白　１．２３　ｇ／ｃｍ３。　［６３。０ＲＦ７编码病毒核衣壳蛋白。在ＯＲＦ７终　病毒无血凝特性，不凝集猪、绵　止密码子之后是３’端非编码区．含有ｐｏｌｙ　羊、山羊、牛、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅和人　（Ａ１结构，其长度在１４—２３个核苷酸之间。在　０型红细胞。但病毒用非离子除垢剂　ｐｏｌｙ（Ａ）结构的上游存在一个高度保守的八　处理后，再用脂溶剂处理，则可凝集小　核苷酸序列。我国分离株Ｃｈ一１ａ株５’一ＮＣＲ　鼠的红细胞。抗体依赖性增强作用　长为１７１　ｂｐ．３’一ＮＣＲ长１５２　ｂｐ．其后有一　（ＡＤＥ）是ＰＲＲＳＶ的一个重要的生物学　长１７　ｂｐ￣ｐｏｌｙ（Ａ）结构。Ｃｈ一１ａ株与美洲型　特性，在猪肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）培养　病毒同源性平均约为９３．５％，与欧洲型病毒　物中加入一定滴度的ＰＲＲＳＶ抗体可　同源性平均约为６５％。　显著提高病毒的含量。另一生物学的　显著特征是对巨噬细胞的亲和性，其　３病毒基因组所编码的蛋白　中ＰＡＭ细胞是其靶细胞，连续传代可　ＰＲＲＳＶ基因组编码的蛋白有复制酶、　见细胞圆缩、聚集、脱落等现象。　聚合蛋白和结构蛋白。ＯＲＦ１编码复制酶和　ＰＲＲＳＶ可通过胎盘进入胎儿体内，特　聚合酶，是唯一的非结构蛋白，参与病毒的　别是在妊娠中期后。病毒可通过胎盘　复制。由ＯＲＦｌａ所编码的聚合蛋白经裂解　感染胎儿。ＰＲＲＳＶ在有循环抗体存在　后产生了６个非结构蛋白（Ｎｓｐｌｅｔ、Ｎｓｐｌ￣、　情况下。仍可持续感染。　Ｎｓｐ２—５）Ｅｎ．其中Ｎｓｐ２在北美洲株和欧洲株　２病毒的基因结构　中有很大差异，其氨基酸序列同源性只有　３２％【剐：由ＯＲＦｌｂ编码的聚合蛋白长约１　４６３　根据病毒基因组核苷酸序列的不　个氨基酸。被ＯＲＦ１ａ编码的蛋白酶切后形　同，可将ＰＲＲＳＶ分为２个基因型，即北　成４个蛋白（ＲｄＲｐ、ＣＰ２—４）Ｅ９１。　美洲型（ＶＲ２３３２）和欧洲型（ＬＶ）圈。　ＧＰ２为结构糖蛋白［１ｏ１，由ＯＲＦ２编码，分　ＰＲＲＳＶ的基因组长度约１５　ｋｂ，含有８　子量为２９—３Ｏ　ｋｕ，有２个明显的疏水峰和糖　个开放阅读框架（ＯＲＦｓ）。其基因组的　基化位点，ＬＶ的ＧＰ２能整合入病毒粒子中。　蔡宝祥．猪布鲁氏杆茵病家畜传染病　［１１】杨立勇．猪附红细胞体病．猪业科学，２００５　学．北京：中国农业出版社，２００１：７６—８１　ｆｌＯ）：５—６　『８１王乐义．猪衣原体病及其防治．猪业科　［１２］王铮．母猪病毒性繁殖障碍病流行特点与防　学．２００５（８１：１７　制措施．猪业科学．２００５（８）：９—１０　［９］蔡宝祥，猪钩端螺旋体病．家畜传染病　［１３］刘喜生．猪繁殖障碍性疾病的防治．当代畜　学，北京：中国农业出版社，２００１：１２６—１２５　禽养殖业，２００３ｆ２１：２２　［１Ｏ］蔡宝祥．猪李氏杆茵病．家畜传染病学，　［１４］王天有．猪传染病现代诊断与防治技术．北　北京：中国农业出版社．２００１，１００—１０３　京：中国农业科学技术出版社．２００３．２５６　ＧＰ３为高度糖基化的结构蛋白．　具有７个糖基化位点。其Ｃ末端为高变　区，通过氨基酸序列比较，两种血清型　的ＧＰ３氨基酸序列的同源性为５５％。具　有免疫原性，但目前认为它是病毒的　结构蛋白之一。针对ＧＰ３的单抗具有　中和活性。　ＧＰ４蛋白是病毒的主要结构蛋白　之一，分子量约为３１　３５　ｋｕ．有４个糖　基化位点，其Ｎ端和Ｃ端有高度的疏水　区。该蛋白氨基端有一信号肽序列．在　ＧＰ４蛋白胞外区第４Ｏ位　第７９位氨基　酸之间有１个可与单抗发生中和反应　的抗原决定簇。　糖蛋白ＧＰ５也称Ｅ蛋白．由ＯＲＦ５　编码，为糖基化的囊膜蛋白．约２ｏ０个　氨基酸，分子量：１６—３Ｏ　ｋｕ。ＧＰ５蛋白含　有２－－４个糖基化位点和一段含３１个氨　基酸的信号肽，另外还含一段很大的　内部疏水区，可能起锚定膜的作用。　ＧＰ５有６个抗原决定簇。可诱导产生中　和抗体，能在体外中和病毒的感染性。　病毒中和作用与抗ＧＰ５抗体效价呈显　著相关性，而且针对ＧＰ５的单抗比ＧＰ４　的单抗在中和病毒方面更为有效可　靠。用含编￣ｑＧＰ５的质粒ＤＮＡ免疫，可　使接种猪产生抗ＧＰ５的特异性中和抗　体。　也有研究表明，该蛋白可诱导细胞　凋亡。Ｏｓｔｒｏｗｓｋｉ等用ＰＲＲＳＶ中和性单　克隆抗体和猪高滴度中和血清抗体，　从ＰＲＲＳＶ　ｃＤＮＡ噬菌体文库中筛选出　了２个Ｂ细胞抗原位点（Ａ和Ｂ１并对其进　行了研究，发现它们均位于ＧＰ５蛋白　上。位点Ａ为非中和抗原位点，能被非　中和抗体识别，但不能被单抗ＩＳＵ２５一　Ｃ１和猪中和抗体识别。位点Ｂ为中和　抗原位点，可同时被单抗ＩＳＵ２５一Ｃ１和　猪中和血清抗体识别．但不被非中和　抗体识别。位ＡＡ在ＰＲＲＳＶ分离株中　高度可变，且具免疫优势，在ＰＲＲＳＶ感　染的早期即可出现抗该位点的抗体。　维普资讯 http://www.cqvip.com －１２・　－ｇ－，￣・母猪繁殖障碍综合征ｌ　ＬＩＶＥＳＴＯＣＫＡＮＤ　Ｐ０ＵＬＴＲＹ｜ＮＤＵｓＴＲＹＮｏ２２７　．位点Ｂ是连续的，在ＰＲＲＳＶ分离株中　分析显示，美洲型毒株间的变异明显大于　随着对ＰＲＲＳＶ分子生物学研究的不　高度保守，且不具免　疫优势．在　欧洲型毒株间的变异。ＰＲＲＳＶ在猪体内持　断深入，ＰＲＲＳＶ的基因、结构和功能　ＰＲＲＳＶ感染后期才出现抗位点Ｂ抗　续感染过程中，会出现病毒亚种或亚群。国　将被进一步揭示，这对于ＰＲＲＳＶ的检　．体。位点Ａ可能充当了１个诱骗因子的　外有研究表明，同一基因型的ＰＲＲＳＶ分离　测将会起到巨大的推动作用。　角色，诱导机体产生抗ＧＰ５抗体，但使　株之间存在明显的序列差异．特别是在基　抗位点Ｂ的抗体产生推迟了至少３周，　因组ＯＲＦｌａ的ｎｓｐｌｂ和ｎｓｐ２．ＯＲＦ３和ＯＲＦ５　所以ＧＰ５蛋白Ｂ位点抗原对设计　的变异性很大。我国已发现ｎｓｐ的变异主要　６小结　猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因　ＰＲＲＳＶ疫苗十分有用。　表现在氨基酸的缺失，２００６年我国南方爆　组结构及其编码的蛋白已被人们进一　ＯＲＦ６编码非糖基化蛋白，即基　发的高致病性猪蓝耳病就是由ｎｓｐ２缺失３０　步认识。在病毒基因组所编码的蛋白　质蛋　，也称Ｍ蛋白，分子量为１８～ｌ９　ｋｕ。ＶＲ２３３２型和ＬＶ型分别含有１７４和　１７３个氨基酸。Ｍ蛋白的Ｎ端有３个疏水　性跨膜区，针对该蛋白的单抗从欧洲　和北美洲的分离株中识别出２个共同　和１个独特的抗原决定簇。Ｍ蛋白在所　有的ＰＲＲＳＶ株间高度保守，在欧、美　型毒株间也最为保守。通过感染猪康　复血清的Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹试验证明　了Ｍ蛋白具有很强的免疫原性．感染　后１０　ｄ就可以检测该抗体应答　表达　重组的Ｍ蛋白可作为血清学实验的靶　抗原。　ＯＲＦ７编码的核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）　的分子量为１４～１５　ｋＤ，是非糖基化蛋　白。Ｎ蛋白具有强碱性，其Ｃ端在维持　蛋白质构象上发挥重要作用。其Ｎ端　的半段是由Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ三种氨基酸　组成，　在组装核衣壳蛋白的过程中可　能促进Ｎ蛋白和ＲＮＡ基因组的相互结　合，这是两种血清型毒株所共有的特　点。蛋白在病毒粒子中含量较高，约　占病毒蛋白总量的２０％－－ｇ０％，具有极　强的免疫原性。实验表明，感染　ＰＲＲＳＶ后约９～ｌ１　ｄ。机体首先产生针　对该蛋白的抗体，随后产生的才是对　其他蛋白的抗体，该抗体最可维持１年　以上，但是不具备中和活性。　根据Ｎ蛋　白的这种特性．现在更多地被用于该　病诊断方法的研究。　４病毒基　因组的变异　大量的生物学和遗传学证据表　明，ＰＲＲＳＶ存在于不同的毒株或分离　株。病毒ＲＮＡ合成时容易出现内在性　错误　ＲＮＡ基因组因点突变、删除、添　加和取代而具有很高的突变频率。通　过大量的序歹Ｉｊ分析，证日月ＰＲＲＳＶ￣Ｌ美　分离株和欧洲分离株之间存在相当高　的序列差异性。２个基因型毒株的核苷　酸的同源性仅为５５％～７０％。通过序列　个氨基酸的变异株引起的。在编码结构蛋　中，Ｅ、Ｍ和Ｎ蛋白所具有的特性已引　白的基因中，以Ｍ蛋白基因最为保守，而编　起了人们的普遍重视，围绕这些蛋白　码ＧＰ５的基因序列差异最大．ＧＰ５的氨基酸　在免疫学中的应用，各国学者开展了　同源性在北美分离株和欧洲分离株间仅　许多研究。但是，ＰＲＲＳＶ分子生物学　５１％～５５％。安同庆对ＰＲＲＳＶ新变异株的　方面仍有很多问题尚不十分清楚，如　ＯＲＦ５进行序列分析后，发现ＧＰ５蛋白中Ｎ一　非典型的ＰＲＲＳ毒株是如何变异的及　糖链数量增多、Ｎ一糖链遮蔽效应以及主要　病毒基因变异和重组的机制、病毒抗　中和表位的变异可能参与病毒的毒力增强　原和毒力变异的分子基础及其对免疫　和逃避集体免疫。欧洲株和美洲株的前导　系统的抑制机理如何？ＰＲＲＳＶ在猪群　体连接位点之间的序列分析表明，：尽管两　中持续感染的机制如何？如何研制稳　种基因型毒株的前导体的连接序列高度保　定高效安全可靠的基因１：程疫苗，尚　守．但在连接序列和下游开放阅读框之间　有待于进一步研究。　的序列差异比较大。Ｓｔｏｒｇａａｒｄ等在对大量　主要参考文献　新分离的欧洲、型毒株的ＯＲＦ５，ＯＲＦ７的序　列分析与比较后，发现２个基因型毒株的遗　【ｌ】Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ　Ｇ，Ｔｅｒｐｓｔｒａ　Ｃ　Ｔｅｒｐｓｔｒａ　Ｃ，Ｐｏｌ　传多样性的程度是相似的。此外他们还发　Ｊ　Ｍ　Ａ。ｅｔ　ａ１．Ｍｙｓｔｅｒｙ　ｓｗｉｎｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　现欧洲型毒株的遗传多样性分布具有明显　Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｅｌｙｓｔａｄ　ｖｉｒｕｓ．Ｖｅｔ　的地域性。　Ｑ，１９９１（１３）：１２１－１３０．　［２１郭宝清，陈章水，刘文兴，等、从疑似　５分子生物学诊断　。　ＰＲＲＳ流产胎儿分离猪生殖与呼吸障碍综　分子生物学诊断方法主要有核酸探针　合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的研究．中国畜禽传染　病，１９９６（２）：１～５　杂交技术以及反转录一聚合酶反应（ＲＴ—　【３】童光志，周艳君，郝晓芳，等．高致病性　ＰＣＲ）技术等。Ｓｕｒ等以ＰＲＲＳＶ的ＲＮＡ为模　猪繁殖与呼吸综舍征病毒的分离鉴定及　板．通过ＲＴ—ＰＣＲ扩增ＯＲＦ７中的４３３　ｂｐ片　其分子流行病学分析．中国预防兽医学报．　段．应用地高辛标记制备ＰＲＲＳＶ特异性　２００７，２９（５）：３２２－３２６　ｃＤＮＡ探针，建立了检测ＰＲＲＳＶ的ＲＮＡ原　［４】Ｐｒｉｎｇｌｅ　Ｃ　Ｒ．Ｖｉｒｕｓ　ａｘｏｎｏｍｙ　１９９６　位杂交技术。核酸探针杂交技术可以在肺、　ｂｕｌｌｅｔｉｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｘ　ｔｈｉｍｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｃｏｎｇｒｅｓｓ　淋巴组织、巨嗜细胞（ＰＡ，Ｍ）、淋巴结及肾的　ｏｆ　ｖｉｒｏｌｏｇｙ　ｉｎ　Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ．Ａｒｃｈ　Ｖｉｏｒｌ，１９９６，　感染细胞内检测到ＰＲＲＳＶ的ＲＮＡ，比免疫　１４１（１　ｌ１：２２５１－２２５６．　组化具有更高的敏感性和特异性，特别是　［５】Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ　Ｇ，Ｔｅｒｐｓｔｒａ　Ｃ，ｈａｋ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．　检测感染后期的细胞内ＰＲＲＳＶ　的ＲＮＡ。　Ｐｏｒｅｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１３ｔｈ　ｉｎｔｅｒｔｉｏｎａｌ　ｐｉｇ　Ｓｕａｒｅｚ等根据ＰＲＲＳＶ毒株Ｎ蛋白基因０ＲＦ７　ｖｅｒｅｔｉｎａｒｙ　ｓｏｃｉｅｔｙ　ｃｏｎｇｒｅｓｓ．，１９９４，ｌ　１－１４．　序列设计了１对引物，引物的设计一般参照　［６］刘丽霞，沈国顺．猪繁殖与呼吸综合征　０ＲＦ７或其邻近序列，因为核衣壳蛋白基因　分子生物学研究进展．现代畜牧兽医，２００６　相对保守。建立了检￣ＰＲＲＳＶ核酸的ＲＴ—　（１２）：５３～５６　ＰＣＲ方法。从７个西班牙野毒株扩增获得　【７】刘光清，蔡雪晖，仇华吉，等．猪繁殖与　呼吸综合征的研究进展．中国预防兽医学　３１２　ｂｐ的片段。通过测序发现与ＰＲＲＳＶ对　报，２ｏ０１，２３（１）：７２－７６　应的序歹Ｉｊ同源性达９６％一９７％。Ｈｅｎｍｒｔｇ等根　Ｉ８】丁壮，万遂如，金宁一，等．猪的重要传　据ＰＲＲＳＶ　ＯＲＦｌｂ和０ＲＦｖ７的序列设计了巢　染病防治研究新成果．重庆：中国畜牧兽医　式ＰＣＲ，该方法快速、敏感、敏感、可靠、接　学会家畜传染病学分会，２Ｏｏ２，８４～８８　毒９２　ｄ后仍能从精液中检测出病毒ＲＮＡ。