８４ 心血管康复医学杂志２０１１年２月第２Ｏ卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，Ｆｅｂ ２０１１，Ｖｏｌ ２Ｏ Ｎｏ．１ ・传统医学与康复・ 巨噬细胞炎性蛋白一２在病毒性心肌炎小鼠中的表达及 黄芪的干预作用 王仲华，方永祥，李韧 摘要：目的：探讨巨噬细胞炎性蛋白～２（ＭＩＰ一２）在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）小鼠心肌中的表达及黄芪的干预作 用。方法：将４０只雄性Ｂａｌ ｂ／ｃ小鼠随机分为正常对照组［腹腔接种不含柯萨奇 病毒（ＣＶＢ ）的Ｅａｇｌｅ’培养 液，ｌＯ例］、模型组（１５例）和治疗组（１５例），模型组和治疗组腹腔接种ＣＶＢ。建立ＶＭＣ模型，治疗组腹腔注 射黄芪注射液（１０ｇ／ｋｇ・ｄ），其余两组注射等容积生理盐水。第１４ｄ处死小鼠，行苏木素伊红（ＨＥ）染色计算心 肌病理积分，用化学发光法检测肌钙蛋白（ｃＴｎＩ）。蛋白质免疫印迹法检测ＭＩＰ一２蛋白表达，逆转录一聚合酶链 反应（ＲＴ—ＰＣＲ）检测ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ表达。结果：１４ｄ后，治疗组生存率较模型组明显升高（８０．０ ： ５３．３３ ，Ｐ＜Ｏ．０５）；与正常对照组比较，模型组病理积分［Ｏ分：（２．５７±０．４８）分］、血清ｅＴｎＩ水平［（０．２７± ０．０４）ｎｇ／ｍＬ：（Ｏ．６２－１－０．１７）ｎｇ／ｍＬ］、心肌ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ［（Ｏ．３１４－０．０６）：（０．９２±０．２３）］及蛋白表达 ［（Ｏ．２４±Ｏ．０５）：（Ｏ．６７－ｔ－０．１８）］水平均明显提高（尸＜０．０１ 。且ＭＩＰ一２蛋白表达与病理积分和ｃＴｎＩ呈正相关 （ｒ一０．８９，Ｐ＜０．０１；ｒ一０．７４，Ｐ＜０．０５）；治疗组病理积分［（１Ｉ ４２－Ｉ－０．２７）分］、ｃＴｎＩ［（Ｏ．３９４－０．１１）ｎｇ／ｍＬ］、 ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ［（Ｏ．７ｌ土０．１８）］及蛋白表达［（Ｏ．４３￣０．１２）］较模型组明显降低（Ｐ均＜Ｏ．０５）。结论：病毒性心 肌炎ＭＩＰ一２表达显著增加，其表达水平与心肌病变严重程度密切相关，提示ＭＩＰ一２参与病毒性心肌炎发病过 程，减少其产生可能是黄芪治疗病毒性心肌炎的机制之一。 关键词：心肌炎；巨噬细胞炎性蛋白质；肌钙蛋白Ｉ；黄芪 文章编号：１００８—００７４（２０１１）Ｏ１—８４一Ｏ５ 中图分类号：Ｒ５４２．２１ 文献标识码：Ａ Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８～００７４．２０１１．０１．２９ Ｅｘｐｒ￣ｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－－２ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｖｉｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ／ ＷＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｈｕａ，ＦＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ｘｉａｎｇ，ＬＩ Ｒｅｎ／／Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｅｎｚｈｏｕ Ｃｉｔｙ・ Ｃｈｅｎｚｈｏｕ，Ｈｕｎａｎ，４２３０００。Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－－２（ＭＩＰ～２）ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｖｉｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ（ＶＭＣ）ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ４０ ｍａｌｅ ４～ｗｅｅｋ—ｏｌｄ Ｂａｌ ｈ／ｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ：ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｅａｇｌｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏ— ｎｅａｌｌｙ．ｎ＝１０）．ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（ｎ一１５）ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１５）．Ｍｉｃｅｓ ｉｎ ｌａｔｔｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｅａｇｌｅ＇ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ＶＭＣ ｍｏｄｅ１．Ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ， ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎｔｒａｐｅ ｒｉｔｏｎｅａＵｙ ａｔ １０ｇ／ｋｇ，ｅｖｅｒｙ ｄａｙ．Ａｌｌ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ｏｎ １４ ｄａｙ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｒｏｓｓ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅａｒｔ ｗｅｒｅ ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ—ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｔｏ ｃａｌｃｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｈｉｓ— ｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｃｏｒｅｓ．Ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ（ｃＴｎＩ）ｗｅｒｅ ｍｏｎｉｔｏｒｅｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓ— ｃｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ—ＰＣＲ）ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ １４ｄ，ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（８Ｏ．０ ｖｓ．５３．３３ ，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｅ ｓｃｏｒｅｓ Ｅ０ ｓｃｏｒｅｓ ｖｓ．（２．５７±Ｏ．４８）ｓｃｏｒｅｓ］，ｓｅｒｕｍ ｃＴｎＩ ｌｅｖｅｌ［（Ｏ．２７土Ｏ．０４） ｎｇ／ｍｌ ｖｓ．（Ｏ．６２：ｔ：０．１７）ｎｇ／ｍ１］。ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ［（Ｏ．３１４－Ｏ．０６）ＶＳ．（Ｏ．９２￣０．２３）］ａｎｄ ＭＩＰ ２ ｐｒｏｔｅｉｎ［（Ｏ．２４±Ｏ．０５）ＶＳ．（０．６７４－０．１８）］ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ％０．０１ ａｌ１）． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ＭＩＰ一２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｃｏｒｅｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃＴｎＩ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（ｒ＝０．８９，Ｐ＜０．Ｏｌ；ｒ一０．７４，Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｃｏｒｅｓ［（１．４２±Ｏ．２７）ｓｃｏｒｅｓ］，ｃＴｎＩ ｌｅｖｅｌ［（Ｏ．３９±０．１１）ｎｇ／ｍ１］，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ［（Ｏ．７１± ０．１８）］ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ［（Ｏ．４３±Ｏ．１２）］ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５ ａｌ１）．Ｃｏｎ’ 作者单位：郴州市第一人民医院心血管内科，湖南郴州４２３０００ 心血管康复医学杂志２０１１年２月第２０卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，Ｆｅｂ ２０１１，Ｖｏｌ ２０ Ｎｏ．１ ｃｌｕｓｉｏｎ：ＭＩＰ一２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ＶＭＣ，ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ａｓ— ｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｔ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｔｈａｔ ＭＩＰ～２ ｍａｙ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉ— ｔｉｓ．ＭＩＰ－－２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍａｙ ｂｅ ｏｎｅ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｉｎ ｖｉｒａｌ ｍｙ— ｏｃａｒｄｉｔｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ；Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ；Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ 病毒性心肌炎（ｖｉｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ，ＶＭＣ）是临 床常见的心血管系统疾病之一，近年来在成人和青 少年中的发病率呈逐年上升趋势，严重危害人类生 组（ｎ一１Ｏ），模型组（ｎ一１５）和治疗组（ｎ一１５）。 模型组和治疗组腹腔注射０．１ ｍ１内含ｌ×１０ ＴＣＩＤ。。ＣＶＢ。的病毒液，建立ＶＭＣ模型，对照组 命健康。大量的炎症细胞在心肌浸润构成ＶＭＣ特 征性的病理改变。这是一多因素参与的多步骤复杂 过程。目前已证实趋化因子在其中起着关键的作用。 巨噬细胞炎性蛋白一２（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ－－２，ＭＩＰ一２）是趋化因子ＣＸＣ家族成员之 一，可特异性趋化中性粒细胞和淋巴细胞到炎症部 位，在慢性支气管炎、肝炎等多种炎症性疾病的发 生发展中起重要作用Ｉｌ ］。然而ＭＩＰ一２是否参与 ＶＭＣ发病过程国内未见报道。黄芪为临床治疗心 肌炎与心力衰竭的主要药物，近来一项多中心临床 研究表明，黄芪注射液对ＶＭＣ有良好的治疗作 用 ，但其作用机理尚未完全阐明。本研究观察 ＭＩＰ一２在ＶＭＣ小鼠心肌组织中的表达，并以黄芪 进行干预治疗，旨在探讨ＭＩＰ一２在ＶＭＣ发病机 制中的作用及黄芪的干预效果。 １资料与方法 １．１病毒、药品及主要试剂 柯萨奇病毒Ｂ３（ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ Ｂ３，ＣＶＢ３）， Ｎａｎ＠株，由复旦大学附属中山医院卫生部病毒性 心脏病重点实验室提供，在Ｈｅｌａ细胞中传代，冻 融离心三次，上清液分装，并在Ｈｅｌａ细胞测５Ｏ 组织感染率（ＴＣＩＤ 。）为１０ ，于一７Ｏ。ｃ保存备 用，实验用量为ｌ×１０。ＴＣＩＤ。。。黄芪注射液１０ｍｌ （２０ｇ）／支，成都地奥九泓制药厂生产（批准文号： 国药准字Ｚ５１０２１７７６）。兔抗小鼠的ＭＩＰ一２单克隆 抗体购于美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司，Ｔｒｉｚｏｌ试剂、Ｓｕ— ｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆转录试剂盒及聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 试剂盒均购于美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，ＭＩＰ一２和磷 酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）引物由上海生工生物 技术有限公司合成。 １．２实验动物、分组及模型制备 雄性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠４Ｏ只购于复旦大学动物实验 科学部（批号：ＳＣＹＫ沪２００２—０００２），４周龄，纯 种，体重ｌ２～１６ｇ。将其随机分为３组：正常对照 腹腔接种０．１ ｍｌ不含ＣＶＢ。的Ｅａｇｌｅ’培养液。病 毒接种日为Ｏｄ。治疗组于接种病毒后０．５ｈ腹腔注 射黄芪注射液ｌＯｇ／ｋｇ，１次／ｄ，其余两组腹腔注射 等容积的生理盐水，１次／ｄ，连续２周，两组动物 在相同条件下饲养，记录各组每天存活小鼠数。第 １４ｄ断颈处死全部存活小鼠，摘眼球法取外周血并 分离出血清（３０００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ），保存于一 ２０。Ｃ冰箱中，然后无菌取出心脏，将心脏沿左室中 线切为两半，一半用４０ｇ／Ｌ甲醛固定，石蜡包埋 后，作病理组织学检测；另一半迅速放人液氮，再 转移至一７０。Ｃ冰箱保存，用于提取总ＲＮＡ和蛋白。 １．３血清肌钙蛋白（ｃＴｎＩ）的测定 取５Ｏ扯ｌ上述血清，置于Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｃ公司 生产的肌钙蛋白检测标准试剂块上，用化学发光法 定量检测ｃＴｎＩ。 １．４病理学检查 常规苏木素一伊红（Ｈ．Ｅ）染色，２００倍光镜 下观察心肌病理改变，并根据文献方法［４ 计算心肌 病变（炎性浸润及坏死）积分，即每张切片随机取 ５个高倍视野，计算每个视野中炎性细胞浸润及坏 死区域面积与整个视野的面积之比，无病变计０分， 病变面积＜２５ 计１分，２５ ～５０ 计２分，５１％ ～７５ 计３分，≥７６ 计４分。 １．５逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）检测心 肌组织中ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ表达 采用Ｔｒｉｚｏｌ试剂一步法提取心肌总ＲＮＡ，获得 的ＲＮＡ按ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔⅡ逆转录试剂盒说明合成ｃＤ— ＮＡ，按ＰＣＲ试剂盒说明进行ＤＮＡ扩增。ＭＩＰ一２ 引物序列：上游５ 一ＣＴＧ ＣＡＣ ＣＡＣ ＣＡＡ ＣＴＧ ＣＴＴ ＡＣ一３ ，下游：５ 一ＧＴＣ ＴＧＧ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＡＴ ＴＧＴ ＧＴ一３ ，ＰＣＲ产物长度为６６０ｂｐ；内参 照基因ＧＡＰＤＨ引物序列：上游：５ 一ＣＧＧ ＡＡＴ ＴＣＧ ＣＣＡ ＣＣＡ ＴＧＣ ＡＧＧ ＴＣＣ ＣＴ一３ ，下游：５ 一ＧＣＴ ＣＴＡ ＧＡＣ ＴＡＧ ＴＴＣ ＡＣＴ ＧＴＣ ＡＣＡ ＣＴ 一３ ，扩增产物长度４６８ｂｐ。ＰＣＲ反应条件：９４。Ｃ 心血管康复医学杂志２０１１年２月第２ｏ卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，Ｆｅｂ ２０１１，Ｖｏｌ ２０ Ｎ ０＿１ 预变性４ ｍｉｎ，然后９４℃变性４５ ｓ一５７℃退火４５ｓ 一７２℃延伸１．５ ｍｉｎ，２７个循环，最后在７２℃延伸 分析及两两比较ｑ检验，相关性分析采用直线相关 分析，Ｐ＜Ｏ．０５为差异有显著性。 ２结 果 １０ ｍｉｎ。取上述ＰＣＲ产物５ ｌ，在含１．５ 溴乙锭 的琼脂糖凝胶电泳分离后，扫描仪扫描，用Ｔｏｔａｌ ｌａｂ分析软件进行条带扫描分析，计算ＭＩＰ一２ ＰＣＲ 产物吸光度与ＧＡＰＤＨ产物吸光度之比值，作为 ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ相对含量，并重复３次独立实验。 １．６ Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法检测心肌组织中ＭＩＰ一２ 蛋白表达 ２．１各组小鼠生存率比较 正常对照组无小鼠死亡，模型组第２～５ ｄ各死 亡１只，第６ｄ死亡２只，第７ｄ天死亡１只，生存 率为５３．３３ （８／１５），治疗组第３、４、６ ｄ各死亡 １只，生存率为８Ｏ．ＯＯ％（１２／１５），生存分析结果显 将心肌组织于液氮碾磨，以三去污裂解液裂解。 以ＢＣＡ蛋白定量试剂测定蛋白浓度，５０／￣ｇ蛋白与 示，治疗组生存率较模型组明显提高（Ｐ＜Ｏ．０５）。 ２．２心肌病理组织学变化 加样缓冲液混合，在ｌＯ 不连续十二烷基硫酸钠一 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶中电泳分离，电转移至聚偏 氟乙烯（ＰＶＤＦ）膜，孵育一抗、二抗，以Ｇ—ａｃｔｉｎ 为内参照，用增强化学发光（ＥＣＬ）试剂显色，曝 正常对照组心肌排列规则，胞浆着色均匀，无 炎性细胞浸润；模型组可见大量的炎性细胞浸润、 心肌纤维断裂和部分心肌组织坏死，呈现典型的 ＶＭＣ改变；治疗组病变明显减轻，仅出现少量的 光、显影、定影。胶片条带用薄层扫描仪进行扫描 坏死灶和炎性细胞浸润。治疗组心肌病理积分明显 低于模型组，差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．０１）。图１（见 封四），表１。 后，运用Ｉｍａｇｅｒ ２２００软件分析各产物积分光密度 值，ＭＩＰ积分光密度值与８一ａｃｔｉｎ积分光密度值比 值作为ＭＩＰ蛋白相对表达量。 １．７统计学处理 ２．３各组血清ｃＴｎＩ水平比较 正常对照组血清中存在低水平的ｃＴｎＩ，模型组 全部资料均使用’ＳＰＳＳ １３．０软件进行统计学分 析，计量资料以均数±标准差（ｚ±ｓ）表示，生存 率采用Ｋａｐｌａｎ—Ｍｅｉｅｒ分析，组间比较行单因素方差 ｃＴｎＩ水平较正常对照组显著升高（Ｐ＜Ｏ．０１），经过 黄芪干预治疗后，治疗组ｃＴｎＩ水平下降，与模型组 比较差异有显著性（Ｐ＜Ｏ．Ｏ５），见表１。 表１各组病理积分、ｃＴｎＩ及ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ、蛋白表达水平比较（ｘ－＋ｓ） 注：ｃＴｎＩ：心肌肌钙蛋白，ＭＩＰ一２：巨噬细胞炎性蛋白一２。与正常对照组比较△△Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ；与模型组比较ＡＰ＜Ｏ．０５。 ２．４心肌组织中ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ的表达 ｎＩ的相关性分析 直线相关分析表明，模型组中ＭＩＰ一２蛋白的 条带密度扫描及半定量分析显示，模型组心肌 ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ表达水平较对照组明显增高（Ｐ＜ 表达水平与病理积分呈显著正相关（ｒ一０．８９，Ｐ＜ ０．Ｏ１），与ｃＴｎＩ亦呈正相关（ｒ一０．７４，Ｐ＜０．Ｏ５）。 ３讨论 ０．０１），而治疗组心肌ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ表达水平明 显低于模型组（Ｐ＜Ｏ．Ｏ５），见图２，表１。 ２．５心肌组织中ＭＩＰ一２蛋白的表达 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测结果显示，与正常对照组 比较，模型组ＭＩＰ一２蛋白表达水平显著增加（Ｐ ＜Ｏ．０１），而治疗组黄芪治疗后，ＭＩＰ一２蛋白表达 水平较心肌炎模型组明显降低（Ｐ＜０．０５），见图３， 表１。 ＶＭＣ是由嗜心肌病毒侵犯心肌引起的心肌炎 症，引起ＶＭＣ的病原体有多种，其中以ＣＶＢ 最常 见。目前认为病毒的直接作用和机体的免疫反应是 ＶＭＣ的主要发病机制，其中免疫反应引起的炎症 细胞的浸润和心肌细胞的坏死是ＶＭＣ急性期最具 ２．６模型组ＭＩＰ一２蛋白的表达与病理积分和ｅＴ— 特征性的病理变化 ］。ＭＩＰ一２是１９８８年Ｗｏｌｐｅ等 心血管康复医学杂志２０１１年２月第２Ｏ卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，Ｆｅｂ ２０１１，Ｖｏｌ ＺＯ Ｎｏ．１ Ｍ ００ ｂｐ ００ ｂｐ ＭＩＰ一２ ６６０ ｂｐ ００ ｂｐ ００ ｂｐ ＧａＰＩ）Ｈ ４６８ ｂｐ ０Ｏ ｂｐ 磷酸甘油醛脱氢酶） ＯＯ ｂｐ ０Ｏ ｂｐ 图２各组小鼠心肌巨噬细胞炎性蛋白【ＭＩＰ）一２ ｍＲＮＡ表达 Ｍ：标志；１；正常对照组；２；模型维；３：黄芪治疗组 ＭＩＰ一２ Ｂ—ａｃｔｉｎ 图３各组小鼠心肌ＭＩＰ一２蛋白表达 Ａ：正常对照组；Ｂ：心肌炎模型组；Ｃ：黄芪治疗组 用脂多糖刺激鼠巨噬细胞系ＲＡＷ２４６．７，在上清液 中首次分离到的蛋白质。ＭＩＰ一２来源于多种细胞， 如巨噬细胞、中性粒细胞、血管内皮细胞等。ＭＩＰ 一２是一种碱性蛋白，分子量为６ＫＤ，其ｃＤＮＡ编 码１００个氨基酸，成熟的蛋白质有７３个氨基酸残 基。ＭＩＰ一２的主要生物学功能是趋化和活化中性 粒细胞和淋巴细胞参与炎症反应。ＭＩＰ一２的肝素 结合位点可与内皮细胞相互作用，上调白细胞表面 黏附分子ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８的表达，最终引导白细胞穿 越血管壁到达炎症部位 ］，从而在许多炎症性疾病 的发生和发展中发挥重要作用。 ｃＴｎＩ是近几年来发展起来的反映心肌细胞损伤 的血清标志物，具有高度的敏感性和特异性。本研 究发现，与对照组比较，模型组病理积分、血清 ｃＴｎＩ水平、心肌ＭＩＰ一２ ｔｕＲＮＡ及蛋白表达水平均 明显增高，且ＭＩＰ一２蛋白表达与病理积分和ｃＴｎＩ 水平呈正相关，与文献报道相符［７］，提示ＭＩＰ一２ 参与了ＶＭＣ的发生发展过程，并与病变严重程度、 心肌细胞的损伤密切相关，可作为病情评估和预后 判断的观察指标。其机制可能与其增加中性粒细胞、 淋巴细胞、巨噬细胞等炎症细胞向心肌浸润，加重 心肌炎症反应有关。Ｋｉｓｉｍｏｔｏ等［８］研究发现，皮下 注射ＭＩＰ～２单克隆抗体可明显缓解ＶＭＣ小鼠心 肌病变和心肌损伤，心肌浸润的巨噬细胞、淋巴细 胞显著减少，并且呈剂量依赖性。因此，抑制ＭＩＰ 一２的表达可能成为治疗ＶＭＣ的一个潜在的、有 价值的靶点。 黄芪又名绵黄、独根、二人抬，为豆科植物膜 荚黄芪和蒙古黄芪的干燥根，具有补气升阳、益卫 固表、利尿消肿、托毒生肌之功效，擅益气理虚、 伏正固本。现代药理学研究证明，黄芪含有多糖、 皂甙、黄酮和微量元素等多种成份，皂甙类有明显 的抗病毒及正性肌力作用，多糖类则明显具有调节 免疫的功能。动物实验和临床研究证实，黄芪对 ＶＭＣ有良好的治疗作用，具有抑制病毒复制，改 善心功能、减轻心肌病理改变等疗效［ｇ ，但其作 用机制不完全清楚。本研究中，ＶＭＣ小鼠给予黄 芪注射液干预治疗后，小鼠生存率提高，心肌病理 积分和血清ｃＴｎＩ水平降低，ＭＩＰ一２ ｍＲＮＡ和蛋白 表达水平明显下调，与模型组比较差异均有显著性， 提示抑制ＭＩＰ一２表达可能是黄芪治疗ＶＭＣ的机 理之一。这为黄芪的进一步开发应用打下基础，其 机制可能与抑制ＭＩＰ一２表达，减少了炎性细胞向 心肌的浸润有关。由于黄芪含有多种成分，具体是 什么成分使得ＶＭＣ小鼠ＭＩＰ一２的表达减少，或 者是某些成分的共同作用，这有待于以后的进一步 研究。 参考文献： ［１］曾玉兰，杨荣时，彭红星．盐酸氨澳索对吸烟诱导的支气管炎 大鼠ＭＩＰ～２的影响［Ｊ］．中国现代医学杂志，２００９，１９ （１７）：２５８５—２５８７． ［２３ Ｎｊｏｋｕ ＤＢ，Ｌｉ Ｚ，Ｍｅｌｌｅｒｓｏｎ ＪＬ，ｅｔ ａ１．ＩＰ一１０ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｗｈｉｌｅ ＭＩＰ一２ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ ｈａｐｔｅｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅｐａｔｉ— ｔｉｓ口］．Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ，２００９；３２（１）：５２—５９． ［３］国家九五攻关全国协作组．急性病毒性心肌炎的药物治疗观察 ［Ｊ］．中华心血管病杂志，１９９９，１７（７）：４１３—４１５． ［４３于小华，李双杰，张 平．纳米ａ一亚麻酸对病毒性心肌炎小 鼠巨噬细胞移动抑制因子表达的影响［Ｊ］．实用儿科临床杂志， ２００９，２４（１３）：９７６—９７８． ［５］Ｄｅｎｎｅｒｔ Ｒ，Ｃｒｉｊｎｓ ＨＪ，Ｈｅｙｍａｎｓ Ｓ．Ａｃｕｔｅ ｖｉｒａｌ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ［刀．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ，２００８，２９（１７）：２０７３—２０８２． ［６３ Ｌｏｍａｓ—Ｎｅｉｒａ ＪＬ，Ｃｈｕｎｇ ＣＳ，Ｗｅｓｅｈｅ ＤＥ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ（ｗｉｔｈ ｓｉＲＮＡ）ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍ１Ｐ一２ ｖｅｒ— ＳＵＳ ＫＣ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ，ｎｅｕ－ ｔｒｏｐｈｉｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｅｐｔｉｃ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ， ２００５。７７（６）：８４６—８５３． ［７］Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｃ，Ｋａｗａｍａｔａ Ｈ，Ｓａｋａｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐｒｏｄｕｃ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ２（ＭＩＰ一２）ｂｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｍｏｄｕ— ８８ 心血管康复医学杂志２０１１年２月第２Ｏ卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，Ｆｅｂ ２０１１，Ｖｏｌ ２０ Ｎｏ．１ ｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｗｉｔｈ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ＭＩＰ一２［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００１，７５（３）：１２９４—１３００． 中国中医急症，２００７，１６（１）；９５—９６． ［１０］于善良，吴 梅．黄芪制剂并常用西药治疗急性病毒性心肌炎 ４０例观察［Ｊ］．心血管康复医学杂志，２００６。１５（３）：２９３— ２９４． ［８］Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｃ，Ａｗａｍａｔａ ＨＫ，Ｓａｋａｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＭＩＰ一２ ｉｎ ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ Ｂ３ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０００， ３２（４）：６３１—６３８． （收稿日期：２０１ｌ一０１一ｌ４） ［９］朱红俊，陆佳．黄芪治疗病毒性心肌炎药理研究进展［Ｊ］． 极化液与参松养心胶囊在治疗室性早搏中的作用 李志梅，常超 摘要：目的：对比观察极化液（氯化钾＋胰岛素＋葡萄糖）和参松养心胶囊治疗室性早搏的疗效和不良反应。方 法：１２４例室性早搏病例被随机分为极化液组（６２例）和参松组（６２例），极化液组给予极化液和美托洛尔治疗， 参松组给予参松养心胶囊并美托洛尔治疗，治疗２周后．观察两组室性早搏发作以及不良反应的情况。结果：治疗 ２周后，参松组控制室性早搏有效率明显优于极化液组（８８．７１ ：６７．７ ．Ｐ＜０．０５），出现的不良反应也明显少 于极化液组（１．６ ：１１．３ ，Ｐ＜０．０５）。结论：参松养心胶囊治疗室性早搏的效果较极化液好，且不良反应少。 关键词：胰岛素；人参；心律失常 文章编号：１００８—００７４（２０１１）０１—８８－０２ Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１ＯＯ８—００７４．２０１１．０１．３０ 中图分类号：Ｒ５４１．７ 文献标识码：Ａ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＧＩＫ ａｎｄ Ｓｈｅｎｓｏｎｇｙａｎｇｘｉｎ ｃａｐｓｕｌｅｓ ｏｎ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ／ＬＩ Ｚｈｉ－ｍｅｉ。ＣＨＡＮＧ Ｃｈａｏ／／Ｆｉｒｓｔ Ｄｅ— ｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈａｎｄａｎ Ｃｉｔｙ。Ｈａｎｄａｎ，Ｈｅｂｅｉ，０５６００１，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ＋ｉｎｓｕｌｉｎｅ＋ｋａｌｉ— ａｍ（ＧＩＫ）ａｎｄ Ｓｈｅｎｓｏｎｇｙａｎｇｘｉｎ ｃａｐｓｕｌｅ（Ｓｈｅｎｓｏｎｇ）ｔｒｅａｔｉｎｇ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ（ＶＰＣ）． Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １２４ ＶＰＣ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ＧＩＫ ｇｒｏｕｐ（ｎ一６２）ａｎｄ Ｓｈｅｎｓｏｎｇ ｇｒｏｕｐ（ｎ＝６２）．Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ＧＩＫ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ＧＩＫ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ ｗｈｉｌｅ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｓｈｅｎｓｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｓｈｅｎｓｏｎｇｙａｎｇｘｉｎ ｃａｐｓｕｌｅ ａｎｄ ｍｅｔｏｐｒｏｌｏ１．Ａｆｔｅｒ ｔＷＯ ｗｅｅｋｓ．ｔｈｅ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ＶＰＣ ａｎｄ ｄｒｕｇ ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ ｔＷＯ ｗｅｅｋｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ＶＰＣ ｉｎ Ｓｈｅｎｓｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉ— ｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＧＩＫ ｇｒｏｕｐ（８８．７１％ＶＳ．６７．７ ，Ｐ＜Ｏ．０５），ａｎｄ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ＧＩＫ ｇｒｏｕｐ（１＿６％ＶＳ．１１．３ ．Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｓｈｅｎｓｏｎｇｙａｎｇｘｉｎ ｃａｐｓｕｌｅ ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｌｅｓｓ ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｔｈａｎ ＧＩＫ ｓｏｌｕｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ￣Ｉｎｓｕｌｉｎ；Ｇｉｎｓｅｎｇ；Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ 极化液是指将１．５ｇ的氯化钾、８Ｕ普通胰岛素 的，有室性早搏且心功能２级的患者１２４例，年龄 加入到１Ｏ 的葡萄糖注射液５０Ｏｒａｌ里，我们临床使 用一般是静脉滴注，１～２周为一个疗程 ］，为了探 讨参松养心胶囊和极化液对室性心律失常的治疗作 用，特设计此实验来观察两组患者在治疗过程中的 病情变化以及不良反应的出现情况，为室性心律失 常的临床用药提供参考。 １资料与方法 ５５￣６５岁，入选患者均行多次心电图检查和Ｈｏｈｅｒ 检查，有室性早搏，其分级达到Ｍｙｅｒｂｕｒｇ分级４Ｄ 级标准，同时行心脏彩色超声检查和检测心肌坏死 标志物，排除了心肌病和心肌梗塞，还排除了消化 道疾病的患者。人选患者随机分为两组，极化液组 男性４８例，女性１４例，平均年龄（５９±１．４６）岁； 参松组男性５Ｏ例，女性１２例，平均年龄（６０± ２．１３）岁。两治疗组在性别和年龄、疗程等方面差 １．１一般资料 人选２００７年１Ｏ月～２００９年１Ｏ月在我院住院 作者单位：邯郸市第一医院心内一科，河北邯郸０５６００１