整理)MTS 细胞增殖及毒性试验

MTS 或CCK8细胞增殖及毒性试验

一、所需试剂

1、CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay试剂盒（-20℃避光保存，4℃保存6周，黄色）

（1）MTS：新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数在一定范围内呈高度相关。

（2）PES：吩嗪硫酸乙酯，一种电子偶联剂，具有增强的化学稳定性，这使它可与MTS混合形成稳定的溶液

2、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）（保存条件同上，紫色）

（1）WST-8：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐 （2）1-Methoxy PMS：1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯 3、药物或毒素（药物IC50等用到） 4、96孔板

二、实验步骤

1、种板（96孔板）（个/孔），先配总管再加样（多算5孔的量来配总管，以免不够用） DU145 PC3 LNCaP 22RV1 RWPE1 细胞种类 种板数 1000 1500 2000 4000 每种处理设置3个副孔（空白组可1个），加入100μl培养基：

（1）细胞增殖实验：设置NC组，处理组，空白组，6天时间，平均每孔1000-2000个细胞 （2）毒性或药物或放疗IC50：设置梯度给药组（包括不给药组），空白组，平均每孔5000-8000个细胞

2、在37°C，5% CO2的环境下培养

（1）增殖：8h或24h（细胞贴壁时间）,也可种板后直接测第一次，作为基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS 每孔加20μl，CCK8加10μl） （2）毒性和药物：培养24h后加入药物培养48小时及以上

3、增殖实验每天测量一次，以100全培养基：20MTS比例配制总管（CCK8以100:10） 4、吸掉96孔板内待测孔内培养基，每孔加入120μl稀释后的MTS试剂（CCK8加入110μl）

4、在37°C，5% CO2的环境下孵育1-4个小时（一般选2h）

5、选取波长，MTS选492nm，CCK8选450nm，读取吸光度值，记录结果，以时间为横坐标，每日吸光值/基准值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

三、注意事项

1、CCK8原理

WST-8在电子载体1-Methoxy PMS的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比 2、整个过程不可产生气泡，以免对测光产生影响

3、如果需要以后检测每孔加入 25ul 10% SDS终止反应，避光保存 于室温的湿盒中最多可保存18小时

4、可在待测孔四周加入PBS防止外围的待测孔液体挥发影响结果。

（更新于2018.11）