第２５卷第６期２０１６年１２月中国组织化学与细胞化学杂志ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬｏＦＶ０１．２５．Ｎｏ．６Ｄｅｃｅｍｂｅｒ．２０１６ＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹＡＮＤＣＹＴＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ脂褐素三种染色方法比较董愉，张芬芬，吴惠群，梁英杰４（中山大学附属第一医院病理科，广州５１００８０）［摘要］目的比较显示脂褐素的３种特殊染色方法，探讨哪一种方法更适合应用于临床病理诊断。方法分别采用三氯化铁一铁氰化钾、醛品红和ＰＡＳ３种特殊染色方法，检测ＨＥ染色石蜡切片中呈浅棕色或金黄色的颗粒是否为脂褐素。三氯化铁一铁氰化钾染色的脂褐素呈蓝黑色颗粒，醛品红染色的脂褐素呈深紫色颗粒，ＰＡＳ染色的脂褐素呈红色颗粒。结果通过３种染色结果的比较，发现三氯化铁一铁氰化钾染色对比清晰，定位准。结论三氯化铁一铁氰化钾、醛品红、ＰＡＳ三种染色均可用于显示脂褐素，但三氯化铁铁氰化钾染色方法优于其他两种。［关键词］脂褐素；三氯化铁铁氰化钾染色；醛品红染色；ＰＡＳ染色［中图分类号］Ｒ３３１［文献标识码］ＡＤＯＩ：１０．１６７０５／ｊ．ｃｎｋｉ，１００４—１８５０．２０１６．０６．０１６ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｒｅｅｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎＤｏｎｇＹｕ，ＺｈａｎｇＦｅｎｆｅｎ，ＷｕＨｕｉｑｕｎ，ＬｉａｎｇＹｉｎｇｊｉｅ＋（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ可ＳｕｎＹａｔ—ｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８０，Ｃｈｉｎａ．）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｒｅｅｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎａｎｄｆｉｎｄｔｏｏｕｔｗｈｉｃｈｏｎｅｉｓｔｈｅｂｅｓｔｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｒｅｅｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｓｔａｉｎａｎｄｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｔｈｅｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｉｎＨＥ—ｓｔａｉｎｅｄｐａｒＭｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓ，ｎａｍｅｌｙｆｅｒｒｉｃｃｈｌｏｒｉｄｅ—ｐｏｔａｓｓｉｕｍｆｅｒｒｉｃｙａｎｉｄｅ（ＦＣＰＦ）ｗｈｉｃｈｓｔａｉｎｓｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｂｌｕｅ—ｄａｒｋ，ａｌｄｅｈｙｄｅ—ｆｕｃｈｓｉｎ（ＡＦ）ｗｈｉｃｈｓｔａｉｎｓｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｄｅｅｐ—ｐｕｒｐｌｅ，ａｎｄＰｅｒｉｏｄｉｃＡｃｉｄＳｃｈｉｆｆ（ＰＡＳ）ｗｈｉｃｈｓｔａｉｎｓｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｒｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＩｎｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ，ＦＣＰＦｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｓｈｏｗｎｔｏｂｅｔｈｅｂｅｓｔｃｏｎｔｒａｓｔａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｌｏｃｃａｎｉｚａｔｉｏｎ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＡｌｌｔｈｒｅｅｍｅｔｈｏｄｓａｒｅｕｓａｂｌｅｆｏｒｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｓｔａｉｎｉｎｇ，ｏｆｗｈｉｃｈＦＣＰＦｉｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎ；ｆｅｒｒｉｃｓｔａｉｎ．ｃｈｌｏｒｉｄｅ—ｐｏｔａｓｓｉｕｍｆｅｒｒｉｃｙａｎｉｄｅｓｔａｉｎ；ａｌｄｅｈｙｄｅ—ｆｕｃｈｓｉｎｓｔａｉｎ；ｐｅｒｉｏｄｉｃａｃｉｄＳｃｈｉｆｆ（ＰＡＳ）脂褐素沉积在人体各组织器官细胞中，常见于肝脏、肾脏、心肌、肾上腺与神经细胞，主要分布在细胞核周围。在ＨＥ染色中，脂褐素和某些其他色素一样呈浅棕色或金黄色的颗粒，不容易区分。在临床病理诊断中，往往需要证实这些色素是否为脂褐１材料材料与方法收集中山大学附属第一医院２０１５—２０１６年上半年ＨＥ染色中含有黄棕色或棕褐色色素的病例８例，素，以便辅助病理诊断。用特殊染色技术可以证实这些色素是否为脂褐素。常用的脂褐素特殊染色方法有多种，各有其优点和不足。本文对常用的三氯化铁．铁氰化钾、醛品红、ＰＡＳ３种脂褐素染色方法常规脱水石蜡包埋，行连续切片，切片厚度为４～５ｔｘｍ。将３张连续切片分别进行三氯化铁一铁氰化钾、醛品红和ＰＡＳ染色，３种染色所用试剂均为本科室自行配制。２染色方法ｕｏ进行比较，探讨哪一种方法更适合应于临床病理诊断。２．１三氯化铁铁氰化钾染色切片脱蜡至水，蒸馏水稍洗，浸入高铁化物液作用２～３ｒａｉｎ；流水冲洗后核固红复染胞核１０ｒａｉｎ；稍水洗，常规脱水透明，中性树胶封片。２．２醛品红染色［收稿日期］２０１６—１０—２０［修回日期）２０１６—１２—１４［作者简介］董愉，女（１９７７年），汉族，主管技师￥通讯作者（Ｔｏｗｈｏｍｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅｓｈｏｕｌｄｂｅ切片脱蜡至水，酸化高锰酸钾氧化５ｒａｉｎ；稍水洗，２％草酸漂白１ｒａｉｎ；洗水冲洗，７０％乙醇稍洗；ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）ｌｉａｎｇｙｊｊ＠１６３．ｃｏｒｎ醛品红液浸染（加盖）１０ｒａｉｎ；７０％乙醇洗２次，每次５６０中国组织化学与细胞化学杂志第２５卷约３０ｓ，至切片没有染液脱出；稍水洗，常规脱水透明，中性树胶封片。２．３结果ＨＥ染色，脂褐素呈浅棕色颗粒，细胞核蓝色，胞质红色（图１Ａ）；三氯化铁一铁氰化钾法染色，脂褐素呈暗蓝黑色颗粒，细胞核红色（图１Ｂ）；醛品红法染色，脂褐素呈深紫色颗粒，黏液也染成深紫色（图１Ｃ）；ＰＡＳ法染色，脂褐素呈红色颗粒，黏液也染成红伍．（罔１Ｄ］＋ＰＡＳ染色切片脱蜡至水，１％高碘酸氧化１０ｍｉｎ；稍水洗，蒸馏水洗３次，无色品红液室温暗处加盖作用２０ｍｉｎ；ｌ％偏重亚硫酸钠洗１ｍｉｍ，流水冲洗；苏木素复染；流水冲洗，常规脱水透明，中性树胶封片。。、毋．鬣嚣≯≯皋《ｉ：！零蟛叩＿雩、。、．ｆ’１・固、，一ｐ’■ｔ１专擘★Ｄ图ｌ３种不旧脂褐索染包方法效果比较箭，脂褐素；晕０．黏液；比例尺，５０／ｘｍＦｉｇ．１Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎｓｔａｉｎ；ａｒｒｏｗｓ，ｌｉｐｏｆｕｓｃｉｎ；ａｓｔｅｒｉｓｋ，ｍｕｃｕｓ；ｓｃａｌｅｂａｒ，５０ｐ，ｍ讨论色素依据其来源分为３类：内源性色素、外源性色素和人为色素。脂褐素属于内源性色素，由机体细胞内呈棕褐色颗粒，与其它一些不同性质和来源的色素相似而不易区别，必须借助于特殊染色才能将这些色素加以区分出来，因此，“色素染色”的意义就在于鉴别和证实它们，以便辅助病理诊断［２］。自身所产生。其积累随年龄增长而增多，是衰老的重要指征之一。见于浅表皮肤者俗称“老年斑”。有如结肠黑变病号熳性肠出血其肠黏膜内均见色素沉着，用特殊染色方法可进行鉴别，前者所含色素为研究指出，脂褐素沉积在人体各组织器官细胞中，导致细胞代谢减缓，活性下降，从而造成人体器官功能衰退产生衰老。在ＨＥ染色切片中，脂褐素在组织脂褐素，后者含的色素为含铁血黄素［３］。脂褐素特殊染色方法有多种，常用的有三氯化铁一铁氰化钾染色法、醛品红法和ＰＡＳ法。３种染色第６期董愉等．脂褐素三种染色方法比较５６１脂褐素的化学成分非常复杂，三氯化铁一铁氰化钾染色主要是因为脂褐素细胞含有高价铁，脂褐素内的还原物质与高铁化物溶液内的高铁离子作用被综上所述，３种特殊染色方法均可用于检测组织中的脂褐素，但三氯化铁．铁氰化钾法具有更快捷、与组织其它成分对比好，更容易观察的优点，是首选的脂褐素染色方法，尤其是对一些含黏液的组织进行脂褐素染色时。参考文献［１］梁英杰，凌启波，张威．临床病理学技术．广东：人民卫生出版社，２０１１，１６７—１６９．［２］董妙珠，肖萍，洪新宇，等．不同染色法检测豚鼠皮肤黑色素的比较研究．环境与职业医学，２００６，２３（５）：４２３－４２５．还原为亚铁盐，亚铁盐再与铁氰化钾反应而呈暗蓝色。进行三氯化铁一铁氰化钾染色时，要注意三氯化铁一铁氰化钾染色是进行性染色，切片在高铁化物内的时间不能太长，时间太长可显示任何能还原高铁化物的物质而造成背景染色，染色过程中应该不时在镜下观察以控制染色效果。醛品红和ＰＡＳ试剂较为常用，配好后可存放较长时间，一般实验室都有，需要染色时不用每次新鲜配制，但操作步骤比三氯化铁铁氰化钾法多，另外醛品红法和ＰＡＳ法除了显示出脂褐素外，也能将黏液显示出来，二者均呈深紫色或红色。如果组织中也含有黏液，则着染同样颜色的黏液会影响脂褐素的观察。［３］张品南，夏作利，郭群．结肠黑变病的形态学与组化研究．现代中西医结合杂志，２００８，１７（３５）：５４２１３４２２．［４］ＴｉｍｉｒａｓＰＳ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＡｇｉｎｇ．ＮｅｗＹｏｒｋ＂ＴｈｅＭａｃｍｉｌｌａｎＣｏｍｐａｎｙ，１９７２，５０２－５０６．
