SOP-细胞常规维持培养

细胞培养操作-sop

一、 实验目的：

通过维持培养得到一定数量状态良好的细胞，为后续预实验、筛靶、验证实验做准备。

二、 实验器材：

超净工作台 37℃二氧化碳恒温培养箱 离心机 倒置显微镜 移液

6cm培养皿 1.5mL EP管 头（1mL 200ul 20ul） 废液桶 CO2

三、 实验试剂：

0.25%胰蛋白酶 或 含0.53mMOL EDTA胰蛋白酶溶液 PBS

高糖DMEM或RPMI 10完全培养基

贴壁细胞系培养（6cm培养皿为例）

四、 操作流程：

1） 镜下观察细胞密度及培养基颜色，颜色微黄，密度80％以上可进行传代

2） 用1mL移液器吸起原有培养基，弃去

3） 沿着6cm培养皿的侧壁，缓慢加入1mL的PBS液,稍微换匀6cm培

养皿以洗掉残余的培养基

4） 加入500uL 的0.25%胰蛋白酶或 含0.53mMOL EDTA胰蛋白酶溶液

迅速放入培养箱，2min后在倒置显微镜下观察，细胞开始回缩变圆，弃去胰酶溶液

5） 加入1ml培养基终止细胞消化，吹打使细胞脱离分散，然后收集于1.5mL

EP管中准备离心

6） 离心机离心1000rpm 2min

7） 离心后弃去上清，加入1mL新鲜培养基重悬，轻轻吹打成均匀细胞悬液

8） 根据实验需要，接入适量的细胞到培养皿中，最后补足到5mL，摇匀后放

入培养箱培养。

悬浮细胞

一、 操作流程：

1）接收客户提供的悬浮细胞，观察细胞状态，直立T25瓶使细胞沉降下去

2）吸去上清培养基，余下细胞收集与1.5Ml EP管中离心

3）离心机离心1000rpm 2min

4）离心后弃去上清，加入1mL新鲜培养基重悬，轻轻吹打成均匀细胞悬液

5）根据实验需要，接入适量的细胞到实验孔板中，余下细胞在T25瓶中继续培养

半贴壁细胞

半贴壁细胞传代时，首先把悬浮于培养基中的细胞收集于管中，然后贴壁的细胞操作手法跟贴壁细胞相同，两者混合离心传代即可。