蛋白纯化缓冲液配制

分子量 K2HPO4.3H2O K2HPO4 228.22 KPB

1M K2HPO4.3H2O 228.22g 定容 1L 1M KH2PO4 136.1g 定容 1L 0.1M KPB母液(pH7.4) 1M K2HPO4 1M KH2PO4 定容至1L 配制 80.2 ml 19.8 ml 174.2 KH2PO4 136.09 NaCl 58.44 KCl 74.55 (NH4)2SO4 132.14 NaOH 40 离子层析 0.45um膜 2ml/min 每天 KPB 0.01M 2L 0.5M KCl + 0.01MKPB 1L 2M NaCl 1L 1M NaOH 1L Water 2L 20%Eth 1L 流动相 1*0.5*74.55= 37.28g KCl 1*2*58.44 = 116.88g NaCl 1*1*40 = 40g NaOH

疏水层析 0.45um膜 ml/min 每天 1M 硫铵 + 0.01MKPB 1L 流动相 1*1*132.14 = 132.1g 硫铵 KPB 0.01M 1L 0.5M NaOH 1L Water 1L 20%Eth 1L 1*0.5*40 = 20g NaOH 1M硫铵(可重用) 0.5L（处理样品） 136.09/2= 68g 硫铵

凝胶过滤层析 0.22um膜 (分子筛 [dex75 3-70kD][dex200 10-600kD]) 0.5ml/min 0.2M KCl + 0.01MKPB 1L 流动相 1*0.2*74.55= 14.91g KCl 可用来脱盐 0.5M NaOH 1L Water 1L 20%Eth 1L

1*0.5*40 = 20g NaOH HPLC缓冲液配制

100倍1M KPB [pH2.7] 0.5L 母液 KH2PO4 H3PO4 200mM(20.8g/L)烟腈母液 10ml

10mM尼克酰胺标样 10ml

0.0122g 分子量122.12 0.208g 分子量104 440超纯水+ 50ul 200mM的母液 ,反应20min +500ul乙腈终止 离心 34.025g 17.1ml HPLC流动相 纯水定容0.6L 100倍 KPB 色谱纯乙腈 4 ml 200 ml Tris系列缓冲液

**由于凝胶纯化后得过离子柱二次重纯，所以凝胶柱里面不加盐离子 第一次纯化凝胶柱 20mM Tris-HCl pH7.5 Tris [121.14] 2.42 约1ml浓HCl 到pH7.5 定容1L 第二次纯化离子柱Q柱 20mM Tris-HCl pH8.8 Tris [121.14] 2.42 约0.5ml浓HCl 到pH7.5 定容1L

20mM Tris-HCl 1MKCl pH8.8 Tris [121.14] 1M KCl

2.42 74.55 约0.5ml浓HCl 到pH7.5 定容1L