栓皮栎虫瘿的酚性成分及其生物活性

云南植物研究２００１，２３（１１：１２６—１．３４　Ａｅ切Ｂｏｔ￣ｃａＹｕｎｎａｒ￣ｅａ　栓皮栎虫瘿的酚性成分及其生物活性　周志宏　，李玛玲　，陈国珍　，陈植和　，杨崇仁　（ｉ　中Ｎ科学院昆明植物研究所植物化学卅放研究实验室．云南昆明６５０２０４；　２昆明医学院云南省天然药物药理重点实验摩，云南昆明６５０００３）　摘要：从栓皮栎（　帆螂删埘垃ⅡＢＩ）虫瘿中分离了２对平衡互变异构体和４个单体化合物，　通过光谱数据和化学方法鉴定为：Ｇ一１为１一Ｏ一（３　一没食子酰基）没食子酰基一ａ—Ｄ一葡　萄吡喃糖和１—０一（４　一没食子酰基）没食子酰基一０一Ｄ一葡萄呲喃糖的平衡互变异构体，　Ｇ一２为３—０一没食子酰基一没食子酸和４一Ｏ一没食子酰基一没食子酸的平衡互变异构体，Ｇ　３为１，６一二一Ｏ一没食于酰基一３一Ｄ一葡萄毗喃糖，Ｇ一４为１，２，３，６一四一Ｏ一没食于　酰基一ｐ—Ｄ一葡萄毗喃糖．Ｇ一５为１一Ｏ一没食子酰基一０一Ｄ一葡萄吡喃糖，Ｇ一６为没食子　酸甲酯。对Ｇ一１、Ｇ一３和Ｇ一４进行了初步的抗肿瘤、抗脂质过氧化和抗血小板聚集活性　实验　关键词：壳斗科；栓皮栎；虫瘿；酚性戚分：抗肿瘤活性；抗脂质过氧化活性；抗血小板聚　集活性　中图分类号：Ｑ　９４６。ｔｔ　２８５　文献标识码：Ａ　文章编号：０２５３—２７ｏｏ｛￣ｏＯｌｌ０１—０１２６—０９　Ｐｈｅｎｏｌｉｃ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｇａｌｌｓ　ｏｆ　１２ｕｅｒｃ￣ｖａｒ／ａｂ／／／ｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ａｃｆｉ￣ｔｉｅｓ　ＺｔｔＯＵ　Ｚｈｉ—Ｈｏｎｇ　，ＬＩ　Ｍａ—ｉｉｎｇ２．ＣＨＥＮ　Ｇｕｏ—Ｚｈｅｎｚ，　ＣＨＥＮ　Ｚｈｉ—Ｈｅｚ．ＹＡＮＧ　Ｃｈｏｎｇ—Ｒｅｎ　（‘￡幽锄，　矿脚　竹·魁哪　ｇ　妇矿Ｂ　ｙ一蕊　一　Ｍ　，　叠　一，Ｋ　ｉ　Ｅ　６５０２。４·Ｃｈｉｎａ；　２　Ｙｕ，ｎ．－￣ｎ缸　／ｄ￣，ａｏｒｙ　吊们加∞　ｏｆ　Ｊ￣ｄ　Ｄｄ　，　删曲　Ｃｏ￣＇ｅ　ｏｆＭＭｉｄｎｅＩ　Ｋ　ｉ　Ｅ　６５Ｏ２Ｏ４．Ｃｈｉｎ．）　址　：Ｔｗ０ｔａｌｌｔ￣ｏｅｒｓ．Ｇ一１［１—０一ｃ　３　一ｇｓｌｌｏｙＬ）一ｇ￣ｏｙｌ—　—Ｄ一目ｌｌｃ。ｐｙｍｎ０ｓｅ　ａｎｄ　１—０一　一ｇａｌｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　４一ｇ日ｌｌ　一目ａ１ｌｉｃ　咐ｔ　池Ｂ１．，ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｗｉｔＩｌ　ｆｏｕｒ　ｐＬ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏ盯叩舢ｍ出：Ｇ一３　ｃ　１．６　ｃ４　一ｅｍｉｌ）　１　０ｖＪ—ｐ—Ｄ—　ｕ。叩ｖ唰ｒ　ｅ］∞ｄ　Ｇ一２［３一目　ａｃｉｄ］Ⅶｅ工ｅ　ｌ舯ｌａ　ｅｄ　ｆｍｍ岫０一ｄｉｇａ　ｌ—ｐ—Ｉｌｌ一日Ｌｌｃ０ｐｙ肼１０５ｅ）．Ｇ一４　ｆ１．２．３．６—０一唰疆ｇａｕｏｙＩ—ｐ—Ｄ—　啦０Ｐｙ咖呻ｅ），　一ｐ—Ｉｌｌ—　．　Ｇ一５（１一Ｏ一　Ｎｂｉｔｏｒｙ　ｅⅡ　ｇ￣，ｉｏｎ　ｗ　ｏｓｅ）ａｎｄＧ一６（　ｃ　ａｃｉｄｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｌｅｒ）　唧　ｖｄｙ．　ｉｎ—　ｏｆＧ一１．Ｇ一３　ａｎｄＧ一４　ｏｎ∞ｍｅ　ｒ　ｓｔｒａｉｍ．１ｉｐｉ￣ｐｅｒ￣ｄｄａｆｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｐｌａｔｄｅｔ　ａｇｇｒｅ—　ｉｎｖ￣ｔｉｇａｔｅｄ／ｎ　Ｋ　ｗｏｒｄｓ：Ｆａｇｓｅｅｅｅ１　ｂｌｏｏｄ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　踞叫　∞　踟　佣　航　．Ｐｈｅｎｏｌｏｉｄ￣．Ａｍｉ岫０ｒ，Ａｎｔｉ—ｌｉｐｉｄ　ｐｅ眦ｉｄ砒ｉ０力，．￣ｎｔｉ—　通信联系＾　收稿日期：Ｉ９９９—０８—０３，Ｉ９９９一１０—２ｏ接受发表　维普资讯 http://www.cqvip.com

期　周志宏等：栓皮栎虫瘿的酚性成分及其生物活性　ｌ２７　壳斗科（Ｆａｇａｃｅａｅ）植物栓皮栎（Ｏ—　ｖａｒ／ａｂ／／／￣Ｂ１．），又称软术栎、粗皮栎、白麻　栎，我国大部分省区都有分布，其壳斗富含单宁，种子含淀粉，可供酿酒和作饲料（中国　科学院植物研究所，１９７２）。该植物叶背常生长虫瘿。虫瘿的形、色似樱桃，质地坚硬．　是由一种象鼻虫产卵于叶脉中刺激植物细胞快速增殖发育而成。一些植物的虫瘿是重要的　单宁原料，在轻化工业和医药工业中均有重要的价值。日本九州大学西冈五夫的研究组曾　对我国产五倍子（Ｒｈｕｓ　ｃｈ／ｎｅｎｓ／ｓⅥｉ　ＪＪ虫瘿）和土尔其产五倍子（Ｑｕｅｒｃ．ｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｏｒｉａ虫瘿）的　单宁成分进行过研究（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，１９８２，１９８３）。本文报道昆明产栓皮栎虫瘿的酚性化学成　分及其生理活性。　１结果与讨论　新鲜栓皮栎虫瘿１０５ｇ的５０％丙酮浸提物经葡聚糖凝胶和大　Ｌ吸附树脂等柱层析分离　纯化，得两对缩酚酸型平衡互变异构体（Ｇ—ｌ和Ｇ一２）和４个酚类化台物单体（Ｇ一３～　Ｇ一６）。在化学结构鉴定的基础上，进行ｒ初步的体外肿瘤细胞毒活性，抗脂质过氧化活　性，以及抗血小板聚集活性实验研究。　１．１化合物的结构鉴定　Ｇ一１为灰白色无定形粉末，红外光谱在３３７３ｃｍ　有羟基吸收峰，１７１７ｃｍ　有羰基吸　收峰；负离子ＨＲＦＡＢ—Ｍｓ给出其分子式为ＧＯＨ２０Ｏ】４；其　ＣⅫＲ谱上有一典型的８一Ｄ一　葡萄毗喃糖基信号（占９６．１４，７８．７２，７８．ｏ２，７４．∞，７１．ｏ６，６２．３１），端基碳的高场化学位　移表明该糖基以酯甙键的形式存在（孙旺达，１９８８）；　Ｈ　ＮＭＲ谱上端基质子信号８５，６６（ｄ，　Ｊ＝７．ＯＨｚ），表明葡萄糖为８构型。　Ｈ和”Ｃ　ＮＭＲ谱提示其酚性部分为（３　一没食子酰基）　没食子酰基和（４　一没食子酰基）没食子酰基的混合物，二者的比例约为３：ｌ（Ｔａｂｌｅ　ｌ，　２）。具有两个没食子酸单元以上的多没食子酸酯都属于缩酚酸酯类，其投食子酰基的酯键　比糖酯键易于水解，在邻位羟基的影响下，缩酚型的酯键能在极缓和的条件下被甲醇分　解，生成没食子酸甲酯，也能在较为温和的条件下分解生成更简单的没食子酸糖酯和没食　子酸。将Ｇ—ｌ进行甲醇醇解，在５Ｏ。ｃ的水浴中２０　ｍｉｎ即有没食子酸甲酯和ｌ一０一没食　子酰基一８一Ｄ一葡萄吡喃糖生成；将Ｇ—ｌ溶解于蒸馏水中，在５８。ｃ的水浴中加热３０　ｒａｉｎ　即有没食子酸和１一Ｏ一没食子酰基一３一Ｄ一葡萄吡喃糖生成（Ｆｉｇ１）。鉴于间一二没食子　酰基与对一二没食子酰基类水解单宁常具有平衡互变现象，难以进一步分离纯化　（Ｎｉｓｈｌｚａｗａ，１９８２），故Ｇ一１应为１一Ｏ一（３　一没食子酰基）没食子酰基一目一Ｄ一葡萄毗　喃糖（１）和１一Ｏ一（４　一没食子酰基）没食子酰基一８一Ｄ一葡萄吡喃糖（２）的平衡互　变异构体混合物，二者比例约为３：１。　Ｇ一２为灰褐色无定形粉末，负离子ＨＲＦＡＢ—Ｍｓ谱给出分子式为（ＣＩ４Ｈｍ０９）；其　ｃ　ＮＭＲ谱和　Ｈ　ＮＭＲ谱除没有ｐ—Ｄ一葡萄毗喃糖基信号外，其它信号与Ｇ一１基本一致，并　与文献报道的间一二没食子酰甲酯和对一二没食子酰甲酯平衡互变异构体的化学位移值基　本一致（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，１９８２）（１　ｌｅ１，２）。故Ｇ一２应为３—０一没食子酰基一没食子酸（３）　和４一Ｏ一没食子酰基一没食子酸（４）的平衡互变异构体混合物。　Ｇ一３为白色无定形粉末，负离子ＦＡＢ—Ｍｓ质谱得准分子离子峰ｏｚ／ｚ　４８３［Ｍ（ｃ２０Ｈ∞　０】４）一Ｈ］一，与１的分子量相同；红外光谱上有羟基和羰基的吸收峰（３３９０，１７０４ｃｍ　）；　维普资讯 http://www.cqvip.com

１２８　云南植物研究　２３卷　其　Ｃ　ＮＭＲ和　Ｈ　ＮＭＲ谱中０一Ｄ一葡萄吡喃糖的信号除ｃ—ｌ位酯化外，ｃ一６位向低场位　移至潮．４２，表明葡萄糖６位上亦连接了没食子酰基。因此，Ｇ一３鉴定为１，６一二一Ｏ一　没食子酰基一０一Ｄ一葡萄吡喃糖（５）（Ｎｏｎａｋａ，１９８３）。　Ｇ一４为白色粒状结晶，负离子ＦＡＢ—ＭＳ质谱得准分子离子峰ｍ／ｚ　７８７［Ｍ（ｃ３４Ｈ　（　）一Ｈｌ一，提示该化合物由４个单元的没食子酰基和１单元葡萄糖基组成；红外光谱上　有羟基和羰基吸收峰（３３０９，１７０７ｃｍ　）；”Ｃ　ＮＭＲ谱中口一Ｄ一葡萄吡喃糖的化学位移与文　献报道的１，２，３，６一四一Ｏ一没食子酰基一口一Ｄ一葡萄吡喃糖（６）一致（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，　１９８３）。　Ｇ一５为白色无定形粉末，负离子ＦＡＢ—ＭＳ质谱得准分子离子峰ｍ／ｚ　３３１［Ｍ（ｃｌ　ＨＩ＾　Ｏｌ０）一Ｈｌ一　红外光谱有羟基和羰基吸收峰（３４ＯＯ，１７１５ｅｍ　）；”Ｃ和　Ｈ　ＮＭＲ谱上只有各　单元的口一Ｄ一葡萄吡喃糖基和没食子酰基信号　葡萄糖端基碳的化学位移在ｂ＇９５　８１的　高磁场范围，说明其Ｃ一１位连接了没食子酰基（Ｔａｂｌｅ　１，２）　故Ｇ一５鉴定为１一Ｏ一没　食子酰基一０一Ｄ一葡萄吡喃糖（７）（Ｋａｓｋａｉｗａｄａ，１９８４）。　Ｔａｂｌｅ】　ｃ　ＮＭＲ　ｄａｔａ　ｏｆ　ｏ。　Ⅻｍｄｓ　Ｉ～８（６　ＣＤ３ＯＤ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｉ　２　３　４　５　６　７　８　维普资讯 http://www.cqvip.com

期　周志宏等：栓皮栎虫瘿的酚性成分及其生物活性　１２９　Ｇ１ｅ　ｌ　５　６７．ｄ．Ｊ＝７　０Ｈｚ　５．６４，ｄ，　Ｊ＝７　６Ｈｚ　３　３　３０—３　５Ｉ．ｍ　３　４０—３　５５．　Ｈ一２—５１　毗　ｍ（Ｈ一２—５　雌肌　７　７　３　８６，ｄ，　Ｊ＝ｌ】４Ｈｚ　３　６９．ｄｄ　雌　３　７１，ｄｄ　Ｊ＝４　６，１２　４Ｈｚ　Ｊ＝４　９．　１２　２Ｈｚ　Ｇａ１］￣，ｌ　７　４５．ｄ．　Ｊ＝２．Ｏ　７　３８．ｄ．　ｍ　弛　问位　一　＝昱　扎　７　ｌ７　７惦　Ｊ＝２　ＤＨｚ．　７　２２．ｓ　ｍ扎　＝昱　札　＝昱　嘶∞　ＣＨ　０　Ｇ一６为浅褐色针状结晶，　Ｈ　ＮＭＲ谱上有甲氧基质子８３．８０（ｓ，３Ｈ）和没食子酰基质　７　３　子信号胛．０５（ｓ，２Ｈ）；　ｃ　ＮＭＲ谱上有甲氧基碳的高场化学位移（８５２．５１），提示甲氧基与　∞　∞　没食子酰基的羰基相连　所以，Ｇ一６应为没食子酸甲酯（８），其光谱数据与文献报道的　致（孙旺达，１９８８）。　Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆ￣ｔｓ　ｏｆＧ一３　ａ，ｚｄＧ一４ｍｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｒ＂Ｆ　’ａ，ｚｄ　ｃｙｓｔｅＪｎｅ　维普资讯 http://www.cqvip.com

１３０　云南植物研究　２３卷　一　Ｏ】｛　Ｏ　１ｌ　ＯＨ　３　ａｎｄ　４（Ｇ－２１　一一　０Ｈ　ＯＨ　Ｇ：一ｃＩＩ　ｏＨ　０Ｈ　ＯＨ　８ｆＧ·６）　ＯＨ　７　ｒＧ－５１　Ｆｉｇ１　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　·　咖Ｄ０ｕｎ出１—８　１，２生物活性测定　１．２．１抗脂质过氧化活性实验结果表明，Ｇ—ｌ，Ｇ一３和Ｇ一４对Ｆｌｅ２　一半胱氨酸反应　系统所激发的微粒体脂质过氧化有显著抑制活性（Ｔａｂｌｅ　３）。　１．２．２对肿瘤细胞株的细胞毒活性体外实验结果表明，Ｇ一１和Ｇ一４对６个肿瘤细胞　株有不同程度的抑制作用，其中Ｇ一１对Ｈｅｌａ２、Ｇ一４对ＨｌｆｉＯ细胞株的抑制活性较强；Ｇ　３没有抑制活性（Ｔａｂｌｅ　４）。　ｌ　２．３对血小板聚集的抑制活性体外抑制实验结果表明，Ｇ一１、Ｇ一３和Ｇ一４对由血　（ＰＡＦ）、花生四烯酸（ＡＡ）和二磷酸腺苷（ＡＩ）Ｐ）所致血小板聚集没有抑　小板活化因子维普资讯 http://www.cqvip.com

ｌ期　周志宏等：桂皮栎虫瘿的酚性成分及其生物话性　ｌ３１　制作用。　１．３讨论　栓皮栎叶虫瘿中分离到的化合物主要是出解单宁和没食子酸衍生物，与国产五倍子和　土尔其五倍子的酚性成分类似（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，１９８２，１９８３）。其中，Ｇ—ｌ和Ｇ一２为间一二没　食子酰基与对一二没食子酰基的平衡互变异构体混合物，这是缩酚酸型水解单宁常有的现　象，难以进一步分离纯化（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ，１９８２）；Ｇ一６可能是Ｇ一１和Ｇ一２等缩酚型聚没食　子酸酯在分离纯化过程由甲醇醇解而生成的（Ｆｉｇ　１，２）（孙旺达，１９８８）。栓皮栎的虫瘿　富含具有拒食作用的单宁类化合物，象鼻虫幼虫通过虫瘿寄生于栓皮栎叶上，在虫瘿中不　仅获得养料生长发育，并得到保护，防止天敌昆虫和鸟类的侵袭。虫瘿寄生的叶片通常发　育瘦小，栓皮栎表象上是受害者，二者在生态学方面的相互关系尚有待于进一步的研究。　对Ｇ—ｌ、Ｇ一３和Ｇ一４的初步体外生物活性实验研究结果表明，这几个水解单宁均　有显著的抗脂质过氧化活性；Ｇ一１和Ｇ一４对６个肿瘤细胞株有不同程度的抑制作用；三　者对血小板聚集均无抑制活性，这可能与它们分子中没食子酰基上的酚羟基有关。水解单　宁类化合物的生物活性及其构效关系有待进一步研究。　ＯＨ　Ｃ—ＯＧｋ　ｌ　ｌＯ　ＯＨ　Ｏ　ｌ１　０ｆＩ　ＯＨ　ＯＨ　Ｃ　Ｏ—Ｃ　ｌ　ｌ（　ｋ＇Ｏ－Ｃ　０Ｈ　＝＝／　ｏＨ　ＯＨ　ｌＩ　Ｏ　ＯＨ　ｏ　间式　ＯＨ　Ｉ　ＭｃＯＨ　｝５０　０Ｃ　对式　ＨＯ　Ｏ　ｌ　ｌＯ｝　ｆ｛ｆｊ—　ｃ—ｏ　Ｇｋ　＿．Ｍｅｏ—Ｃ　０Ｈ　ＯＨ　ｎｇ　２　ｔａｕｔｏｍｅｒｓ　Ｇ一１　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｈ｝￣３１ｙｓｉｓ∞１ｄ　ａｌｃｏｈｏｌｙｓｉ　２实验部分　ｍ谱用Ｂｉｏ—Ｒａｄ丌ｓ一１３５仪以ＫＢｒ压片法测试；ｕｖ谱用Ｓｈｉｍａｄｚｕ　ＵＶ一２１０Ａ仪以甲　醇为溶剂测定，旋光谱用ＳＥＰＡ一３００仪以甲醇为溶剂测定；　Ｃ和　Ｈ　ＮＮＲ谱用Ｂｒｕｋｅｒ一４００　仪，以ＴＮＳ为内标在ＣＤ３ＯＤ中测定；负离子ＦＡＢ—ＭＳ谱在ＶＧＡｕｔｏｓｐｅｃ　３Ｏ０Ｏ谱仪上测定。　维普资讯 http://www.cqvip.com

ｌ３２　云南植物研究　２３卷　实验样品采集于中国科学院昆明植物研究所植物园，栓皮栎植物由我所分类室李锡文　研究员鉴定，标本存于该室标本馆；虫瘿由中国科学院昆明动物研究所昆虫室杨大荣副研　究员鉴定。　２．１提取与分离　新鲜栓皮栎虫瘿１０５　ｇ，捣碎后用５０％丙酮室温浸提３次，每次提泡２４　ｈ，回收溶剂　至小体积，经大孔吸附树脂Ｄｉａｉｏｎ柱层析处理，用水和甲醇洗脱。甲醇洗脱物浓缩至小体　积后用Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＩ－Ｉ一２０柱层析分离，５０％甲醇洗脱，得４个组分（ＦＴ．１—４）。Ｆｒ．１用　ＭＣＩ　ｇｅｌ　ＣＨＰ２０柱层析分离，１０％一６０％甲醇洗脱，再经Ｓ￣ｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２０柱层析纯化，以　５０％甲醇洗脱，得Ｇ—ｌ（化合物１和２）（２００　ｎａｇ）和Ｇ一３（化合物５）（３０　ｎａｇ）；Ｆｒ．２浓　缩放置，得粒状结晶，为Ｇ一４（化合物６）（７００　ｎａｇ）；Ｆｒ．３经ＭＣＩ　ｇｅｌ　ＣＩ－［Ｐ　２０Ｐ柱层析分　离，５％一５０％甲醇洗脱，再用Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２ｏ柱层析纯化，以３０％甲醇洗脱，得Ｇ一２　（化合物３和４）（１４０　ｎａｇ）和Ｇ一５（化合物７）（２５　ｎａｇ）；Ｆｒ．４浓缩放置得结晶Ｇ一６（化　合物８）（２Ｏ　ｎａｇ）　２　２结构鉴定　ｃ—ｌ　灰白色无定形粉末，ｕＶ　／３１ＩＩ：２１８，２７７。ＩＲ（ＫＢｒ）ｏｍ－。：３３７３，１７１７，　１５３７，１４４８，１３２４，１２０２，１０７４，１０２３，９５８，９３１，８８６，８７３。负离子ＦＡＢ一Ⅵｓ　ｒｔｔ＇／ｚ：４８３［Ｍ　（　Ｈ２０ＯＩ４）一Ｈ］，负离子ＨＩｔＦＡＢ—ＮＳ　ｍ／ｚ：４８３．０８１６　Ｍ（Ｃ２ｏＨ２ｏ０ｌ４）一Ｈ］一（计算值：　４８３．０７７５）。　Ｈ和　Ｃ　ＭＲ数据见Ｔａｂｌｅ　１和２　ｃ一１的水解Ｇ—ｌ（５０　ｍｇ）溶解于１０　ｍＬ蒸馏水中，在５８℃的水浴中恒温加热，　ＴＬＣ检测，加热２０ｒａｉｎ时检测到投食子酸和ｌ一０一没食子酰基一８一Ｄ一毗喃葡萄糖，随　着时间推移没食子酸等水解产物逐渐增多　４８　ｍｉｎ后，将水解液在Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ一２０柱上　层析纯化，以５０％乙醇为洗脱剂，得ｃ一５（２５　ｒ嘴）和投食子酸（１６Ⅱ　）（Ｚｈａｎｇ，１９９５）。　Ｇ一１的醇解Ｇ一１（５０ｍｇ）溶解于１０－ｎＩ＿甲醇中，在５ｏ℃的水浴中恒温加热，ＴＬＣ　检测，加热３０ｍｉｎ时检测到没食子酸甲酯和１—０一投食子酰基一８一Ｄ一吡喃葡萄糖，随　着时间推移设食子酸等水解产物逐渐增多。２０　ｒａｉｎ后将醇解溶液在ＳｅｐｈａｄｅｘⅡＩ一２ｏ柱上　层析分离，以３０％乙醇为洗脱剂，得Ｇ一５（２０　ｎａｇ）和Ｇ一６（１９唱）。　Ｇ一２　褐色无定形粉末，Ｕ、　／３１ＩＩ：２１６，２８０。负离子ＦＡＢ—Ｍｓ　ｍ／ｚ：３２１［Ｍ—　Ｈ］。负离子ＨＲＦＡＢ—ＮＳ　ｍ／ｚ：３２１．０２５９［Ｍ（ｃ】４Ｈ１００９）一Ｈ］一（计算值：３２１．０２４７）。　Ｈ　和　Ｃ　ＮＭＲ数据见　ｋ　１和２　ｃ一３　白色无定形粉末，　ｖ　ｎｍ：２１８，２８０。ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ＿。：３３９０，１７０４，１６８８，　ｌ６２５，１５４２，１４５３，１３９５，１３６ｌ，１２８３，１２５８，１２２７，ｌ１４６，１０９０，１０３０，９９１，９５４，９０８，８６８。负　离子ＦＡＢ—Ｍｓ　ｍ／ｚ：４８３［Ｍ（ｃ２０Ｈ２ｏ０】４）一Ｈ：一。　Ｈ和　Ｃ　ＮＭＩｔ数据见Ｔａｂｌｅ１和２。　Ｇ一４白色粒状结晶，ｕ　一ｎｍ：２１８，２８０．５。ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ－。：３３０９，１７０７，１６１５，　１５３８，１４５０，１３５０，１２０４，１０９４，１０３０，９６４，８６７，８１２。负离子ＦＡＢ—　ｍ／ｚ：７８７［Ｍ（Ｃ　Ｈ２宕Ｏ　）一Ｈ］一。　Ｈ和　ＣＩ￣ＭＩｔ数据见Ｔａｂｌｅ１和２　Ｇ一５　灰白色粉末，ｕｖ　ｎｍｌ　２１８．５，２７９。ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ～：３４ＯＯ，１７１５，１６２３，　１５５４，１５１９，１４５１，１４０２，１３５８，１３２７，１２４４，１２１４，１１４４，１ｌ１１，１０７０，１０４４，１０２４，９８６，９４９，　维普资讯 http://www.cqvip.com

期　同志宏等：栓皮栎虫瘿的酚性成分及其生物活性　ｌ　３３　８９８，８６６，７５７　。负离子ＦＡＢ—Ｍｓ　ｎｌ／ｚ：３３１［Ｍ（ｃ】３Ｈ哺０１ｏ）一Ｈ一一。　Ｈ和”Ｃ　ＮＭＲ数据见　ｒａｂｌｅ１和２　Ｇ一６　浅褐色针状结晶，ｕｖ　—ｌⅡｎ：２１８，２７５。负离子ＦＡＢ—ＭＳ　ｍ／ｚ：１８２［Ｍ　（　Ｈ８０５）一２Ｈ］一　Ｈ和　Ｃ　ＮＭＲ数据见Ｔａｂｌｅ１和２。　２　３生物活性实验方法　２　３．１抗脂质过氧化实验方法选用雄ｌ生ｓＤ大鼠（体重２５０～３００　ｇ），参照文献方法制　备大鼠肝微粒体（Ｌｉｕ等，１９９２），ｌ　ｒｙ法进行微粒体蛋白定量（Ｌｏ￣ａｇ等，１９５１），用　半胱氨酸（Ｃｒｙ）反应系统产生氧自由基激发脂质过氧化反应（Ａｎｄｒｅｗ等，１９８３）。以　ＴＥＰ为标准，用硫代巴比妥酸显色法测定反应终产物中丙二醛（ＭＤＡ）含量。若加入Ｃｙｓ　和ＦｃＳＯ４前在体系中加入待测样品，即可观察其对脂质过氧化反应过程中ＭＤＡ生产的影　响　以下列公式计算脂质过氧化抑制率：脂质过氧化抑制率（％）＝１００×（对照管ＭＤＡ　含量一样品管ＭＤＡ含量）／对照管ＭＤＡ含量。　２．３．２抗肿瘤细胞株实验方法ｌ０、ｌ０～、１Ｏ体外抑瘤试验采用改良Ｍ＇ＩＴ比色分析法进行检测（周建　军等，１９９３）　受试样品先用ＤＭＳＯ配制成ｌ０Ｉ２ｍｏｌ／Ｌ后，再用生理盐水依次稀释成１Ｏ～、　、１０。ａｔｏｌ／Ｌ　５个浓度，样品溶解良好　取对数生长期的各细胞株，将　细胞浓度调整为４×１０４／ｍＬ，加入９６孔板中，９０　Ｌ／孔。贴壁细胞在培养箱中放置４ｈ待　贴壁后加入不同浓度的待测样品，每孔ｌ０　。阴性对照为等体积的生理盐水，阳性对照　为米托葸醌。加药组及对照组均设４个复孔，另设４个只加培养基的孔为调零孔。样品的　终浓度分别为ｌ０一、ｌＯ～、１０、ｌ０～、１０一ｍｏｌ／Ｌ。细胞在３７％、５％Ｃ０２培养箱中分别　孵育４８　ｈ（悬浮细胞）、７２　ｈ（贴壁细胞）后，加入ＭＴＦ　５　ｍｇ／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ），１０止／孔。继　续培养４　ｈ后，加Ａ三联液［１０％ＳＤＳ一５％异丁醇一０．０１２　ｍｏＬ／Ｌ　ＨＣｌ（ｗ／ｖ／ｖ）］，１００“Ｌ／　孔，放置１２　ｈ后，用酶标仪（Ｂｉｏｔｅｃｋ　ＥＬ一３４Ｏ，美国）在５７０ｎｍ、６３０　ｎｒｒＩ双波长下测定各　孔的ＯＤ值。　细胞存活率（％）＝（样品孔的ＯＤ均值／阴性对照孔的ＯＤ均值）×１００；细胞抑制　率＝１００％一细胞存活率　用ＧＷＢＡＳＩＣ软件计算各受试药的Ｉｃ∞。　２．３　３抗血小板聚集实验方法参照《药理实验方法学＞（徐叔云等，１９９４）进行样品制　备，以比浊法进行测定。步骤如下：用硅化注射器（预先吸好１／１０血量的３＿吕％枸橼酸钠　溶液）取家兔血浆，以１０００　ｒ／ｍｉｎ离　ｔ３　５　ｍｉｎ，吸出上层ＰＲＰ。余下的血浆再以３ＯＯＯ　ｍｉｎ　离　ｔ３　１５　ｍｉｎ，管中上清液即ＰＰＰ。计ＰＲＰ中血小板数，以ＰＰＰ调节豫Ｐ使血小板数在４０～　４５的范围。取一定量豫Ｐ置于比浊管内，加药液及对照液测定。　致谢本所植物化学研究室仪器组测定光谱数据，分类室李锡文研究员鉴定植物标本；中国科学院昆明　动物研究所昆虫室扬大荣副研究员鉴定虫瘿标本。　［参考文献］　中国科学院植物研究所，１９７２．中国高等植物图鉴（第１册）［　］北京：科学出版社，４５７　孙选旺，１９８８．植物单宁化学［Ｍ］北京：中国林业出版牡　２４７　２６１　维普资讯 http://www.cqvip.com

ｌ３４　云南植物研究　２３巷　周建军，０９３评价抗癌物质活性的改良砌　法［Ｊ］．中国医药工业杂志．２４（４）：４５５～４５７　豫叔云．Ｆ如濂，陈修等．１９９４．药理实验方法学［Ｍ］北京：凡民卫生出版朴．Ｉ１２１　Ａｎｄｒｅｗ　Ｊ　Ｆ．Ｓｅａｒｌｅ　Ｒ　Ｌ．１９８３．Ｓ６ｒａ，ｄａｔｉ￣ｏｆ　ｍｌｅｎ￣ｍｌ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｍｔ　ｂｙ　ｉｒｏｔｔ　ａｎｄ　ｃｙｓｔｅｌｎｅ　ＬＪｊ　Ｂ／，￣ｔｏｒ＋，２１２：５４９～５５４　Ｋａｓｈｉｗａｄａ　Ｙ．Ｎｏｎａｌ，ａ　Ｇ．Ⅻ　Ｉ．Ｉ　Ｔｍａｄ￣ａｎｄ　ｍｌａｔｅｄ　吡口ｄ日ＸＸ］［ＩＩ　Ｒｈｕｂａｒｂ（４）：ｌ　田ｌ　ａｎｄ　８ｌｉｆｔｔＣｔｌｌＩｅｓ　ｎｅｗ　ｄ—ｆｏ　眺ｍｎｌｎｓ［ＪＪ　Ｐｈｏｔｏ２乩　．３２　ｔ９）：３４６１　３４７０　Ｉｆｉｕ　Ｇ　ｒ，ＺｈａｎｇＴＭ－Ｗ　Ｂ　Ｅ．ｅｔ　ａｉ，１９９２．Ｐｔｏｔ￣ｉｖｅ　ｔ　ｆｏ　哪ｎａｔｕｒａｌ　ｐｈ￣ｍｌｌｃ∞　ｐ０ｕｎｄｓ　ａｇ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉ￣ｔ　ｄａｍａｇｅｔｏ　ｂｉｏｍｍｆｉ￣ｒａｎｅｓ［ＪＪ　Ｂｉ￣＇ｈｅｍｉｃａｌ　ｍ，　，，４３（２）：１４７～１５２　Ｌｏ￣Ｔｇ　０　Ｈ．Ｒｏｓｅｂｒ￣ｇｈ　Ｈ　Ｊ．－　Ａ　Ｌ．　ｏ２，Ｉ９５１　Ｐｔ￣ｅｉｎ　ｍ朗蚰ｍｍｅｍ　ａｔｅ　ｌｍ　ｐｈｏｎｏｌ　ｒｔ￣ｇｅｎｔＪＪ　，Ｂ／ｏ　Ｃｈｅｍ，１９３：３６５　２＇７６　Ｎｉ　ｓｈｉ￣ｗａＭ－Ｙ　ａ　鱼ｈＬＴ，Ｎｏｎａｋａ　Ｇ．ｅｔ　ｏ２，１９８２　Ｔａｎｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｃ·ｍ　。ｕ廿ｄｓ　Ｐａｒｔ　５ｃｈⅢａｄｅｎ呲　ｏｆ　ｐｏｌｙａｌｌｏｙｌｇｊｕｍ￣ｆｒｏｗｎ　Ｃｋｍｉ￣　ｄ　ｍ　ｌ　ＪＪ＋　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ．Ｐｅｒ￣ｉ．，Ｌ　Ｔｒａｍ．Ｉ：２９６３　２９６８　Ｎｉｓｈａ￣ａ　Ｍ．Ｙａｒｎａ　ｒ，Ｎ￣ｒａｋａ　Ｇ，ｄ　．１９８３．　ｒａｎｎｉｒ￣ａｎｄ　ｚ￣ｌａｔｅｄ。　ｐ　１　ｄｓ　９　Ｉ￣ｌａｔｉｏｔｔ　ａｎｄ　ｅｈ￣￣ｅｄｚａｔｉｍｔ　ｐｏｔｙ　一　ｔｏｙｔｇｌｕｅｔ￣ｓｆｎ：￣ｎＴｕ￣ｉｓｈ　ｓａｔｓ【　）：Ｊ］，　ＳｏｃＰｅｒ／￣Ⅲｍｗ．Ｉ：９６Ｉ一９６５　Ｎ｛ｍａｋａ　Ｇ－Ｎｉｓｈｉｃｋａ　Ｉ　１９８３　Ｔａｎｎｉｎｓ　ｒｅｌａｔｅｄ￣ｎｔｐｏａｔｄｓ　ｘ　Ｒｈｕｂ￣ｂ／２｝：ｌ帅ｌ　【ｌ几ａｎｄ曲ｍｎｕｒ鹄ｏｆ　ａ　ｇ］ｙｃｅｍＩ　ｇ　．ｇ￣ｄｌｉｃ　ｄ　ｕ㈣　％　ｕ。ｙ１　ａｎｄ　ｓ　咖＿Ｊ＿Ｊ　ｃ　Ｐｈａｍ￣Ｂａｉｌ．３１（５）：１６５２～１６５８　Ｚｈａｎｇ　Ｗ　Ｊ，Ｌｉｕ　ＹＱ．ｋ　ｘ　Ｃ．　ａ／．１９９５　Ｃｈｅｍｉｃａ１．￣ｌｓｉｆｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　肿　丘伽Ｙｍｍａｎ［ＪＪ＾咖Ｂｅｔ’　ｍ（云南植物　研究）．１７（２）：２０４～２鹏　［上接１２０页］　Ｍｉｍｔａｎｉ　Ｋ，Ｙｕｄａ　Ｍ，Ｔｍｌａｌ￣ａ　Ｏ．　ｏ２，１９８８　Ｔａｎｇｓｈｅｎｏｓｉｄ￣Ｉ　ａｎｄ　ＩＩ　ｆｍｌｍ　Ｃｈｕａｎ—Ｄ　咖，ｔｈｅ　ｍ０ｔ　ｆｏ　０　【帆Ｏｉｌｙ　＿Ｊ：蕊删Ｐｈａｚ＇ｎＢａｉｌ．３６（７）：２７２６～２７２９　一　Ｒｕ　Ｎ．Ｌｉｌｄａｉｔｗｌｔａｙａ￣ｉｄ　Ｋ．１ｔａｓｉ￣ｍｇ　Ｓ．　ａ／，１９８８　Ｓｉｔｄｉｅａ　ｍ　Ｔｈａｉ　ｎｌｅｄｉｃｉ￣ａ１　ＰａｒｔⅨ．Ｃ￣ｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｍｋｈｅｌ￣　ｔｗｏ　ｎｅｗｇｅｒｍａｃｒａｎｄｌｄｅ　ａｍｉｄｅｓ：Ｊ　，Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，５１（６）：Ｉ２２０～１２２５　Ｒｕａｎｇｔｍ　Ｎ，ｌｌｉｖｅｐｉＳｏｏｎ　Ａ．　Ｇ　Ｌ，　，１９８７　Ｃａｍｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｗ　ｂｏ．／／／ｏｎ／ｉ：ａ—ｍｌｉｔｕｍ￣　ｒ加　ｄｅ　ａｌｋａｌｏｉｄ　【ＪＪ　３＇ｏ２　Ｐｒｏｄ，５０（５）：８９１～８９６　锄　ｕ　Ｎ，Ｒｉｖｅｐｉｌ：ｃｃｎ　Ａ，　Ｇ　Ｌ，　ａ／．１９９８　Ｃｏｎｓｔｌｔｔａｍｔｓ　ｆｏ　Ｐａｒａ￣ｅｈｅｌｌａ　ｂａｉｌｌｃ￣６ｉ，ｔｈｒｅｅ　ｎｅｗ　ｇｅｍ￣ｏｈｄｅｓ［Ｊ　，　Ｐｒｏｄ．５１（１）：１６３　ＴｓｕｋａｍｏｔｏＨ，Ｈｉｓａｄａ　Ｓ．Ｎｉｓｈｉｂｅ　Ｓ．１９８４　Ｉｉｇｒｍｎｓｆｎｉｎ　ｂａｌｋ　ｏｆ　Ｆｒａｘｉａａｓ　ｍａａｄｓｈｕｒｉｃａ　ｖａｔ　ｊａｐｏ，，￣　Ｆ　Ｉｍ　ｒ［Ｊ　Ｊ　Ｃｈｅ＋ｎ　Ｐｈａｍ＋Ｂａｉｌ．３２　ｃ１１）：４４８２～４４８９