中国人兽共患病学报 ２０１７，３３（１） Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｅｓ ６１ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｉ．ｉｓｓｎ．１００２—２６９４．２０１７．０１．０１２ 疱疹病毒ＵＳＩ Ｏ基因及其编码蛋白研究进展 张代熙，程安春，汪铭书 摘 要：疱疹病毒ＵＳ１０基因位于其基因组的短独特区，是病毒复制的非必需基因，编码病毒的磷酸化衣壳一皮层蛋白 或Ｉ型跨膜糖蛋白，可通过特异性识别非经典ＭＨＣ Ｉ型分子的ＨＬＡ—Ｇ胞质尾区，来下调ＨＬＡ Ｇ的表达量并阻断宿主ＮＫ 细胞对病毒的杀伤，从而参与病毒的免疫逃逸；该蛋白通过与宿主蛋白相互作用而发挥致病作用，也能调节其它病毒蛋白如 糖蛋白Ｅ（ｇＥ）等的表达。对ＵＳ１０结合ＲＮＡ的能力及在病毒转录后、病毒毒力中的作用有待于深入研究。 关键词：疱疹病毒；ＵＳ１０基因；Ｕ￥１０蛋白；免疫逃逸 中图分类号：Ｒ３７３．Ｉ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２—２６９４（２０１７）０１—００６１—０６ Ａｄｖａｎｃｅ ｉｎ Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ＵＳ１ ０ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｎｃｏｄｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ＺＨＡＮＧ Ｄａｉ—ｘｉ，ＣＨＥＮＧ Ａｎ—ｃｈｕｎ，ＷＡＮＧ Ｍｉｎｇ—ｓｈｕ （Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｈｅａｌｔｈ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ／Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｉｓ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｈｏｒｔ ｕｎｉｑｕｅ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｇｅｎｏｍｅ ａｎｄ ｎｏｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａ— ｔｉｏｎ．ＵＳＩＯ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙ１ａｔｅｄ ｔｅｇｕｍｅｎｔ—ｃａｐｓｉｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｒ ｔｙｐｅ Ｉ ｔｒａｎｓｍｅｍｈｒａｎｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｗｈｉｃｈ ｓｅ一 １ｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔａｒｇｅｔｓ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｔａｉｌ ｏｆ ＨＬＡ—Ｇ，ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ｎｏｎｃｌａｓｓｉｃａ１ ｃｌａｓｓ Ｉ ＭＨＣ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ａｎｄ ｂｌｏｃｋ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ＮＫ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｅｖａｓｉｏｎ．ＵＳ１０ ｃａｎ ａｌｓｏ ｉｎｔｅｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｈｏｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｐｌａｙ ａ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｒｏｌｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ（ｇＥ）．Ｔｈｒｏｕｇｈ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＵＳ１ ０ ｉｎ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｏｍｂｉｎｅ ｗｉｔｈ ＲＮＡ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｊ ｕｄｇｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ；ＵＳ１０ ｇｅｎｅ；ＵＳ１０ ｐｒｏｔｅｉｎ；ｉｍｍｕｎｅ ｅｖａｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．２０１５ＢＡＤ１２Ｂ０５）ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｎｏ．ＣＡＲＳ－４３—８） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｃｈｅｎｇ Ａｎ—ｃｈｕｎ，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇａｎｃｈｕｎ＠ｖｉｐ．１ ６３．ｃｏｒｎ 疱疹病毒是一种重要的人兽共患病病原，分为 ａ、Ｉ３和ｙ三类亚科［１］。成熟病毒粒子近似球形，由 核心（ｃｏｒｅ）、衣壳（ｃａｐｓｉｄ）、皮层（ｔｅｇｕｍｅｎｔ）和囊膜 （ｅｎｖｅｌｏｐｅ）组成＿２。］。疱疹病毒基因组分为长独特 区（ＵＬ）、短独特区（ＵＳ）、内部重复区（ＩＲ）和末端重 特区，是病毒复制的非必需基因Ｅ５－７３。疱疹病毒 ＵＳ１０基因编码毒粒蛋白，其中ａ一疱疹病毒的１型 人类单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）的Ｕ￥１０基因编码一 种衣壳一皮层相关联的磷酸化蛋白＿８］，目前该蛋白的 功能尚未完全阐明；Ｉ３一疱疹病毒中人巨细胞病毒 （ＨＣＭＶ）的Ｕ￥１０基因编码Ｉ型跨膜糖蛋白，它通 过延缓经典ＭＨＣ Ｉ型分子运输、下调非经典ＭＨＣ 工型分子ＨＬＡ—Ｇ的表达量、阻断ＨＬＡ—Ｇ介导的 复区（ＴＲ）四个部分［３ ］，其中ＵＳ１０基因位于短独 国家科技支撑计划（Ｎｏ．２０１５ＢＡＤ１２Ｂ０５）和国家现代农业（水禽）产 业技术体系专项（ＣＡＲＳ－４３—８） 通讯作者：程安春，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇａｎｃｈｕｎ＠ｒｉｐ．１６３．ＣＯＩＴＩ ＮＫ细胞杀伤能力，参与病毒的免疫逃逸ｌ９。。。；７－疱 疹病毒目前尚未见ＵＳＩＯ的报道。以下就ＵＳＩＯ的 作者单位：１．四川Ｉ农业大学动物医学院禽病防治研究中心，成都 ６１１１３０： 结构和功能做一简要综述，以便为疱疹病毒ＵＳ１０ 的深入研究提供参考。 ２．四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验 室，成都 ６ｌ１１３０； ３．四川农业大学预防兽医研究所，成都 ６１１１３０ ６２ １ ＵＳ１Ｏ基因的研究进展 中国人兽共患病学报 ２Ｏ１ ７，３３（１） 灵长类动物的疱疹病毒如猴疱疹病毒２型…’、黑猩 猩 １疱疹病毒 一及人单纯疱疹病毒１型 的 ＵＳ１０基凶均与ＵＳ１ １基 具有编码区重叠的现象 （见Ｉ冬Ｉ ３），且ＵＳ１０、ＵＳ１ １和ＵＳ１ ２的ｍＲＮＡ为３ １．１ ＵＳ１０基【大ｊ的结构 疱疹病毒ＵＳｌ０基因（或 同源基凶）通常为单拷贝，如鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、鸡马 立克氏病毒（ＭＤＶ）和ＨＣＭＶ（ 图１），位于病毒基 【大ｊ组的短独特区；但也有例外。如禽传染性喉气管炎 病毒（ＩＩ ＴＶ）ＵＳ１０基因… 、８型马疱疹病毒（ＥＨＶ） ｗＨ株的ＩＲ５基冈 ］及水痘一带状疱疹病毒（ｖＺＶ） 端共终端。鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ） 与其他Ｃ｛－疱疹病毒相比，基冈排列顺序为一ＵＳ１一 ＵＳ１Ｏ—Ｓ（）ＲＦ３一ＵＳ２一ＵＳ３一，ＵＳ１０发生了易位，与 ＵＳ１、ＵＳ３转录方向一致”。 的（）ＲＦ６４基 ｌ１ 等，以对称双拷贝形式ｍ现于内 。部重复区和末端重复 ，且转录方向相反（见 ２）。 ＭＤＶ 哪ＩＲＣＭＶ佃ｊ匾 ●—匿＿４ｍ１◆ ＵＳＳ ●＿＿—＿圜一．．－四曩 ｕＳ１０ 圄 —＿圜－．．－嘲－圜＿ ．．－囡４Ｅｎｌ４￣ｌｌ Ｅ ［：＞ＵＳ４ ［二二二ｊ盈［二＝＞ 口露 ＞ ＜ 豳口 仓§ ＵＳ１０ 图１ 以单拷贝形式存在于短独特区的ＵＳＩＯ基因的几种疱疹病毒 Ｆｉｇ．１ Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｏｐｙ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｗｈｉｃｈ ｌｏｃａｔｅｓ ｉｎ Ｕｎｉｑｕｅ Ｓｈｏｒｔ Ｒｅｇｉｏｎ Ｖｚｖ［＝＝ ．．１—团 ＯＲＦ８４ ＯＲＦ６５ —蕾团◆＿●＿衄圈＿＿ ＜＝＝］ ｏＲＦ６９ ◆ ＬＩＳ７ ＩＬＴＶ［：＞．．．●＿ Ｉ◆◆— ＵＳｌＯ ＵＳ２ ＵＳ３￥ＯＲＦｌ ＵＳ４ ◆＜ ＵＳ１０ ＵＳ８ ＵＳ９ ｓＯＲＦ ４１３ ｓＯＲＦ ４１３ ◆ ＵＳｒｏ Ｅ］ｂＰｖ＇－１ ０’ 佃佃一日—一日圈 叫Ｉ Ｉ目◆ 糍 ◆ 图２ 以双拷贝形式存在于内部重复区和末端重复区的ＵＳ１Ｉ｝基因（或同源基因）的几种疱疹病毒 Ｆｉｇ．２ Ｄｏｕｂｌｅ－ｃｏｐｉｅｓ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ（ｏｒ ｉｔｓ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ）ｗｈｉｃｈ ｌｏｃａｔｅ ｉｎ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｒｅｐｅａｔ Ｒｅｇｉｏｎ ａｎｄ Ｔｅｒ— ｍｉｎａｌ Ｒｅｐｅａｔ Ｒｅｇｉｏｎ ＲＮＡ Ｉ ＲＮＡ ＵＳ８Ａ ｃ：＞ ＵＳ９ 图３人单纯疱疹病毒ｌ型、猴疱疹病毒２型、黑猩猩“ｌ疱疹病毒ＵＳＩＯ与ＵＳＩｌ编码区重叠，且 ＵＳ１０、ＵＳＩ１、ＵＳ１２的ｍＲＮＡ为３ 端共终端 Ｆｉｇ．３ ＯＲＦ ｏｆ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｈａｓ ａ １ １０ ｃｏｄｏｎ ｏｕｔ—ｏｆ－ｆｒａｍｅ ｏｖｅｒｌａｐ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳＩ １ ｇｅｎｅ，ａｎｄ ＵＳ１０．ＵＳＩ ｌ ａｎｄ ＵＳ１２ ｇｅｎｅｓ ｓｈａｒｅ ｔｈｅ ｃｏｍｍｏｎ ３ ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｉｎ ＨＳＶ一１．Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ ｈｅｒ— ｐｅｓｖｉｒｕｓ ２ ａｎｄ ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ １期 张代熙等：疱疹病毒ＵＳｌＯ基因及其编码蛋白研究进展 ６３ ２ｏ１２年，Ｗａｔｓｏｎ［１８３等发现ＨＳＶ－１强毒ＭｃＫ— 其它已报道的疱疹病毒ＵＳ１０蛋白均定位于细胞 质：Ｈｕｂｅｒ等＿２ 运用复制缺陷型腺病毒作载体表达 ＨＣＭＶ ＵＳＩＯ基因，通过共聚焦免疫荧光显微镜观 察到Ｕ￥１０蛋白在ＨＥＣ一１Ａ细胞质中以离散形式 存在，并与钙联蛋白（ｃａｌｎｅｘｉｎ）和蛋白二硫键异构酶 （Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ Ｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＰＤＩ）共定位于内质 网上，Ｕ￥１０不与细胞连接标记蛋白——８一连环蛋白 （ｔ？－ｅａｔｅｎｉｎ）共区域化，即Ｕ￥１０蛋白不能到达细胞 ｒａｅ株在第１４３和４１６碱基处发生了插入突变，造成 阅读框下游一系列移码突变而形成了独特的Ｃ端 蛋白序列；Ｍｃｋｒａｅ株的ＵＳ１０基因可编码３１７个氨 基酸，较其他ＨＳＶ一１毒株增加了５－１７个氨基酸残 基。２０１３年Ｇａｒｃｉａ［１ ９］对比ＩＬＴＶ弱毒ＬＴ—Ｉｖａｘ＠疫 苗株和强毒８１６５８株的ＵＳ１０基因序列，发现第１３６ 位氨基酸密码子由ＡＴＧ突变为ＡＴＡ，对应氨基酸 由蛋氨酸变为异亮氨酸，且ＡＴＡ突变仅存在于强 毒株８１６５８，其余弱毒株无此现象，推测该位点可能 与ＩＬＴＶ毒力有关。２０１４年，Ｙａｎｇ＿２叩等在分析 ＤＰＶ致弱毒株基因组分子特性时发现：３种ＤＰＶ 强毒株（２０８５、ＣＳＣ和ｃＨｖ株）ＵＳ１０基因序列相似 性为１００％，而弱毒株Ｋ ｐ６３株在第７４７位核苷酸 后插入了一个碱基Ｔ，使得ＵＳＩＯ从２４９位氨基酸 起发生移码突变，推测该位点可能影响了ＤＰＶ的 毒力。 １．２ ＵＳ１０基因的类型 疱疹病毒的基因表达严 格遵循线性顺序，依照转录顺序的先后可分为立即 早期基因ａ、早期基因Ｊ３和晚期基因 扎 引。Ｈｏｌｄ— ｅｎｌ２ 等采用ＲＮＡ杂交和Ｓ１核酸酶最早分析 ＥＨＶ一１ ＩＲ５基因的转录时相，发现感染病毒后２ｈ 能检测出长０．９ ｋｂ的单股ｍＲＮＡ，且该ｍＲＮＡ的 合成受到核酸合成抑制剂膦酰乙酸（Ｐｈｏｓｐｈｏｎｏａｃｅ— ｔｉｃ Ａｃｉｄ，ＰＡＡ）抑制，确定了ＥＨＶ一１的ＩＲ５基因为 ｙ基因。其后，Ｙａｍａｄａ 发现添加ＰＡＡ的ＨＳＶ－１ 感染细胞中检测不出ＵＳ１０蛋白；而对照组于接毒 后１０ｈ开始检测出ＵＳ１０蛋白，并于１５ｈ到达峰值， 证明ＨＳＶ一１ Ｕ￥１０基因属于７基因。２０１３年， Ｇａｒｃｉａｌ＿１ 结合药物抑制试验和转录时相分析证实 ＩＬＴＶ ＵＳ１０为８基因。 ２ ＵＳ１Ｏ蛋白的研究进展 ２．１ ＵＳ１０蛋白的结构强、弱毒株ＤＰＶ的ＵＳ１０ 基因编码蛋白的氨基酸数量差异较大，由１６０个到 ３０９不等，通常呈ｃ段保守，Ｎ段不保守［２ 。ＨＣ— ＭＶ的ＵＳ１０蛋白由胞外区、跨膜区及胞质尾区构 成＿ｇｊ。ＨＳＶ一１、ＩＬＴＶ、ＤＰＶ的ＵＳ１０及ＥＨＶ一１的 ＩＲ５均含有１３个氨基酸构成的保守序列，经推测该 序列为Ｃ ＨＣ型锌指结构（Ｃ－Ｘ３一Ｃ—Ｘ３一Ｈ～Ｘ３一 Ｃ）ｃ 一 。， 。 ２．２ Ｕ￥１０蛋白的亚细胞定位 蛋白在宿主细胞 内的定位对蛋白的功能有指导意义。Ｙａｍａｄａ等［２ 通过间接免疫荧光实验观察到ＨＳＶ一１感染的Ｖｅｒｏ 细胞中ＵＳ１０蛋白主要定位于细胞核。除此之外， 表面。２０１０年，Ｍａｏｌ＿２ 构建了ＵＳ１０一ＥＧＦＰ及ＡＵＳ１０一 ＥＧＦＰ两种ＭＤＶ重组病毒，通过ＥＧＦＰ可在ＤＦ～１ 细胞中观察到ＭＤＶ的ＵＳ１０蛋白与ＳＣＡ２共定位 于细胞质中。 ２．３ ＵＳ１０蛋白为病毒结构蛋白 为了确定ＨＳＶ一 １的ＵＳ１０蛋白是否为病毒衣壳的组分，Ｙａｍａｄａ等 将ＨＳＶ病毒粒子的囊膜和皮层一衣壳部分通过超速 离心分开，用ＵＳ１０抗体分别与上清（囊膜部分）和 沉淀（皮层一衣壳部分）进行免疫印迹，结果显示：上 清样本没有条带，沉淀样本获得了目的条带，即 ＨＳＶ ＵＳ１０为皮层一衣壳蛋白 引。其他疱疹病毒 ＵＳ１０是否为结构蛋白尚未见报道。 ２．４ ＵＳ１０蛋白参与免疫逃逸ＨＣＭＶ通过抑制 Ｔ细胞的识别功能及ＮＫ细胞毒性产生免疫逃逸。 ＮＫ细胞主要依赖于细胞表面的受体如非典型 ＭＨＣ Ｉ类分子ＨＬＡ－Ｇ来进行调节，ＨＣＭＶ的 Ｕ￥１０编码的Ｉ型跨膜蛋白定位于内质网，可干扰 ＨＬＡ—Ｇ在内质网上的加工过程，下调ＨＬＡ—Ｇ在细 胞表面的表达量，从而间接抑制ＮＫ细胞发挥其正 常的免疫功能Ｌ９ 。 ２．４．１ ＵＳ１０降低ＨＬＡ—Ｇ在细胞膜表面的表达量 Ｐａｒｋ等＿１ 研究ＨＣＭＶ的Ｕ￥１０与非经典ＭＨＣ Ｉ类分子ＨＬＡ—Ｇ的关系时发现，ＵＳ１０可显著下调 细胞ＨＬＡ—Ｇ的表达水平，而ＵＳ９蛋白对细胞 ＨＬＡ—Ｇ的表达水平无影响。再将可稳定表达 ＨＬＡ—Ｇ的人类包皮成纤维细胞（Ｈｕｍａｎ ｆｏｒｅｓｋｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＦＦ）分别感染ＨＣＭＶ野毒株ＡＤ１６９、 缺失株△ＵＳ２一ＵＳ１１和缺失株ＲＶ６７０（缺失ＵＳ２一 ＵＳ１ｌ段所有基因但保留ＵＳ１０基因）并测定细胞中 经典ＭＨＣ Ｉ类分子和非经典ＭＨＣ工类分子 ＨＬＡ—Ｇ的表达量，结果ＡＤ１６９感染细胞中经典 ＭＨＣ工类分子和ＨＬＡ－Ｇ的表达量均显著下降；缺 失株△ＵＳ２一ＵＳ１１感染细胞中经典ＭＨＣ Ｉ类分子 和ＨＬＡ—Ｇ的表达量无变化；缺失株ＲＶ６７０感染细 胞中ＨＬＡ—Ｇ表达量大幅降低，但经典ＭＨＣ Ｉ类分 子表达量无显著变化，表明ＵＳ１０仅特异性下调 ＨＬＡ—Ｇ而不干涉经典ＭＨＣ工类分子。 ６４ 中国人兽共患病学报 ２．４．２ ＵＳ１０蛋白胞质尾区残基对ＨＬＡ—Ｇ降解起 着关键作用 为探究对ＨＬＡ—Ｇ有下调的ＨＣＭＶ ＵＳ１０蛋白的关键区域，Ｐａｒｋ等口。。构建了缺失胞质 尾区１７１－１８５氨基酸残基的缺失株ＵＳ１０△ＣＴ及缺 失跨膜区与胞质尾区的缺失株ＵＳ１０ＡＴＭ＋ＣＴ， 比较两个缺失株与野毒株感染细胞的ＨＬＡ～Ｇ表达 量，结果两个缺失株感染细胞中ＨＬＡ—Ｇ的表达量 均无变化，而亲本株感染细胞的的ＨＬＡ—Ｇ表达量 下降，表明ＵＳ１０下调ＨＬＡ—Ｇ的表达需要依赖于 ＵＳ１０的胞质尾区。 为确定胞质尾区的哪些氨基酸位点是降低 ＨＬＡ—Ｇ表达的关键位点，Ｐａｒｋ等构建了截去胞质 尾区第１７７—１８５位氨基酸的ＵＳ１０Ａ１７７－１８５突变 株，突变株表现了与野毒株同等的ＨＩ Ａ—Ｇ下调作 用，表明胞质尾区残留的第１７１—１７６位氨基酸 （ＴＲＳＬＩ Ｉ ）是发挥下调ＨＬＡ—Ｇ表达量的关键位 点；进一步又构建了１７４位的亮氨酸被替换为丙氨 酸的ＴＲＳ １ＡＩ ＬＬ株、１７４—１７５位的亮氨酸被替换为 丙氨酸的ＴＲＳ ｌＡＡＩ Ｌ株和１７４—１７６位的亮氨酸均 被替换为丙氨酸的ＴＲＳ ＩＡＡＡＩ￣，结果ＴＲＳ Ａｌ ＬＬ 株突变株感染细胞内ＨＬＡ—Ｇ表达水平较低但稍高 于亲本株，ＴＲＳ ｌＡＡｌ Ｌ突变株感染细胞内ＨＩ Ａ—Ｇ 表达水平开始恢复，ＴＲＳ』ＡＡＡｌ突变株感染细胞内 ＨＬＡ—Ｇ表达水平恢复正常，表明胞质尾区第１７４— １７６位的三个亮氨酸是ＵＳ１０识别并靶向作用 ＨＩ Ａ—Ｇ的关键位点＿１ 。 ２．４．３ ＵＳ１０特异性靶向作用于ＨＬＡ—Ｇ的短胞质 尾区 ＨＬＡ—Ｇ对ＵＳ１０介导的降解作用的敏感性 是自身固有的。相较于经典ＭＨＣ Ｉ类分子，ＨＬＡ— Ｇ的胞质尾区更短，由６个氨基酸组成 （ＲＫＫＳＳＤ）［２９３。Ｐａｒｋ等构建了ＨＬＡ—Ｇ△ＣＴ（缺失 胞质尾区）和ＨＬＡ—Ａ２／Ｇ ｔａｉｌ（经典ＭＨＣ工类分子 ＨＬＡ—Ａ２去掉自身胞质尾区，装配ＨＬＡ—Ｇ的胞质 尾区）两个突变细胞株，结果ＨＬＡ—ＧＡＣＴ的ＨＬＡ— Ｇ表达水平不受ＵＳ１０影响；而ＨＩ Ａ—Ａ２／Ｇ ｔａｉｌ的 ＨＬＡ－Ｇ表达水平受到了ＵＳ１０调节。为进一步验 证ＨＬＡ—Ｇ胞质尾区的作用，Ｐａｒｋ将ＵＳ１０分别转 染进表达ＨＬＡ—Ｇ和ＨＬＡ—Ｅ的ＨｅＬａ细胞中。 ＨＬＡ—Ｅ与ＨＬＡ—Ｇ结构非常相似，也是一种非经典 的ＭＨＣ Ｉ类分子，除胞质尾区有３３个氨基酸外其 余部分均与ＨＬＡ—Ｇ相同。经免疫印迹法检测， ＨＬＡ—Ｇ的蛋白水平受到ＵＳ１０的显著影响，而 ＨＩ Ａ—Ｅ仅轻微减少，表明ＨＬＡ—Ｇ的短胞质尾区对 于ＵＳ１０介导的特异性靶向降解作用是至关重要 的 。 ２．４．４ ＵＳ１０调节ＨＩ Ａ—Ｇ介导的ＮＫ细胞杀伤作 用ＨＩ Ａ—Ｇ可抑制外周血ＮＫ细胞（ｐＮＫ）对Ｉ型 人类Ｂ细胞系７２１．２２１的杀伤作用 。 。Ｐａｒｋ等 将ｐＮＫ细胞分别与７２１．２２１、７２１．２２１／ＨＬＡ—Ｇ或 共表达ＵＳ１０的７２１．ｅ２１／ＨＬＡ—Ｇ进行共培养，观 察到ＵＳ１０可降解７２１．２２１细胞中的ＨＬＡ—Ｇ。而 能表达ＨＬＡ—Ｇ的７２１．２２１细胞与亲代细胞相比， 对ｐＮＫ的细胞毒性具有抵抗性。Ｕ￥１０阻断了 ＨＬＡ—Ｇ对ＮＫ细胞的正常调节，从而发挥免疫逃 避的作用＿１ 。 ２．５ ＵＳ１０与疫苗研发ＵＳ１０基因是病毒复制的 非必需基因，因此被广泛用作重组病毒的插入位点。 ２０１０年，Ｇａｏ等口 将ＨＳＮ１禽流感病毒ＨＡ基因 插入ＨＶＴ的ＵＳ１０基因处并测定了重组病毒的体 外生长曲线及免疫保护效果。２０１４年Ｚｈａｎｇ［３ 等 将Ｈ９Ｎ２ ＨＡ基因插入ＭＤＶ ３个内源位点ＵＳ２、 ＵＳ１０、Ｍｅｑ和外源位点ｇｐｔ处，并比较四者的转录 活性，结果ＵＳ１０位点优于外源位点ｇｐｔ，近似于 Ｍｅｑ。上述研究表明ＵＳ１０可作为以疱疹病毒为活 载体研制基因工程疫苗的外源基因插入位点。 ２．６ ＵＳ１０蛋白与宿主蛋白的相互作用 马立克 氏病（Ｍａｒｅｋ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＭＤ）是一种严重的慢性鸡 淋巴瘤疾病，现有的ＭＤ疫苗可抑制淋巴瘤形成， 但无法杜绝病毒的感染和复制 。鸡干细胞抗原２ （ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ２，ＳＣＡ２）是目前广泛推测的ＭＤ 的“抵御基因”产物，恰能弥补该方面疫苗开发的空 缺。ＳＣＡ２是一个大小为１３ ｋＤａ的细胞膜表面蛋 白，对鸡的Ｂ淋巴细胞具有作用 。Ｉ ｉｕ等发 现ＳＣＡ２可与ＭＤＶ的ＵＳ１０蛋白特异性结合口 ； Ｍａｏ研究发现当Ｕ￥１０蛋白存在时，过量表达的 ＳＣＡ２可降低ＭＤＶ的噬斑大小及其体外感染成纤 维细胞的比例＿２ 。 ２．７ ＵＳ１０蛋白对其它病毒蛋白的影响 ＶｚＶ的 ＯＲＦ６４和ＯＲＦ６９为ＨＳＶ一１ Ｕ￥１０的同源基因。 ＯＲＦ６４位于内部重复区，ＯＲＦ６９位于末端重复区， 两者转录方向相反。ＯＲＦ６４和ＯＲＦ６９基因对 ＶＺＶ的复制是非必需的，当双缺失ＯＲＦ６４／６９基因 时，感染细胞出现了广泛的融合现象，大量的多核细 胞形成，胞内核总数超过５Ｏ个，且ｇＥ的表达量远 高于亲本株、△ＯＲＦ６４或△ＯＲＦ６９单缺失株，说明 ＯＲＦ６４／６９的缺失令ｇＥ基因表达量大幅上升，促使 了广泛的细胞融合，即ＯＲＦ６４／６９蛋白对ｇＥ基因 表达具有作用＿３ ，因为ｇＥ可参与ｇＢ介导的细 张代熙等：疱疹病毒ＵＳ１０基因及其编码蛋白研究进展 胞融合 。 ６５ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＵＳ１０ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｔａｒｇｅｔｓ ＨＬＡ—Ｇ ｆｏｒ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ Ｉ－ｊ］．Ｊ Ｅｘｐｅｒ Ｍｅｄ，２０１０，２０７（９）：２０３３ ２０４１． ３展 望 ［１ １］Ｔｈｕｒｅｅｎ ＤＲ，Ｋｅｅｌｅｒ ＣＬ．Ｐｓｉｔｔａｃｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｌ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ １ａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉ８ ｖｉｒｕｓ： ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 除ｌ３一疱疹病毒的Ｕ￥１０基因被证实具有“免疫 逃逸”功能外，其他ＵＳ１０基因的功能仍不清楚。多 种疱疹病毒的ＵＳ１０蛋白ｃ端具有１３个氨基酸残 基构成的Ｃ ＨＣ型锌指保守域（Ｃ—Ｘ３一Ｃ—Ｘ３一Ｈ—Ｘ３一 ｏｆ ｔｗｏ ａｖｉａｎ ａｌｐｈａｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００６，８０（１６）： ７８６３—７８７２． ［１２］Ｌｉｕ Ｃ，Ｇｕｏ Ｗ，Ｌｕ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ｅｑｕｉｎｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ８ ｗＨ ｓｔｒａｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｊ Ｃ），而Ｃ：ＨＣ型锌指结构是一种强大的转录因 子，可与多种单链核苷酸（ｍＲＮＡ或富含Ｇ／ＣＴ的 单链核苷酸）发生特异性结合，蛋白质的翻译、 表达水平。据此推澳０，ＵＳ１０基因可能具有结合 ＲＮＡ的能力，在疱疹病毒中担当转录的角色。 此外，ＨＳＶ一１等多种疱疹病毒ＵＳ１０基因还是强弱 毒株的差异基因，碱基的插入引发的下游一系列移 码突变，有可能是导致病毒致病力降低的重要因素。 因此，ＵＳ１０基因是否具有结合ＲＮＡ的能力、对转 录的影响、在疱疹病毒增殖和致病中的作用等 应该成为今后研究重点。 参考文献： ［１］Ｋｉｎｇ ＡＭＱ，Ｌｅｆｋｏｗｉｔｚ Ｅ，Ａｄａｍｓ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｒｕｓ ｔａｘｏｎｏｍｙ： ｎｉｎｔｈ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ ｖｉ ｒｕｓｅｓ［Ｍ］．Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２０１１． ［２］Ｙｕａｎ ＧＰ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍ０ｒｐｈ０ｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］． Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ，２００５，４９（１）：５０—５５． ［３］Ｇｕｏ ＹＦ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎａｔｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ １ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｂｙ ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆｌｏｗ ｕｈｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｕ— ｃｒｏｓｅ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉ０ｎ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００９， １６１（１）：卜６． ［４］Ａｒｖｉｎ ＡＭ．Ｈｕｍａｎ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ：ｂｉｏｌｏｇｙ，ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ ｉｍｍｕ— ｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ［Ｍ］．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２００７，１（Ｐｔ ２）：１０—２６． Ｅｓ］ｗｕ Ｙ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎａｌ— ｙｓｉｓ ｏｆ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓＣＪ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２０１２，８６（２４）： １３８４１一ｌ３８４２． ［６］Ｈｕ Ｙ，Ｚｈｏｕ ＨｏＢ，Ｙｕ ＺＪ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＵＳ１０，ＳＯＲＦ３，ａｎｄ ＵＳ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ Ｇｅｎｅｓ，２００９，３８（２）：２９５～３０１． ［７ｊ Ｗｕ Ｙ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｖｉｒｕｌｅｎｔ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ２０１２，８６（１０）：５９６５ ５９６５． Ｅ８］Ｖｉｔｔｏｎｅ Ｖ，Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈ Ｅ，Ｔｒｉｆｆｅｔｔ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ０ｎ。ｆ ｉｎ ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｅｇｕｍｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｉ，２００５，７９（１５）：９５６６—９５７１． ［９］Ｆｕｒｍａｎ ＭＨ，Ｄｅｙ Ｎ，Ｔｏｒｔｏｒｅｌｌａ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇ ａｌｏｖｉｒｕｓ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｄｅｌａｙｓ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍ— ｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ ｃｌａｓｓ Ｉ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００２，７６（２２）： １１７５３—１１７５６． ＬｌＯ］Ｐａｒｋ Ｂ，Ｓｐｏｏｎｅｒ Ｅ，Ｈｏｕｓｅｒ ＢＬ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ＨＣＭＶ ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｖｉｒｏｌ，２０１２，８６（９）：５４０７—５４０７． ［１ ３］Ｃｏｈｒｓ ＲＪ，Ｈｕｒｌｅｙ ＭＰ，Ｇｉｌｄｅｎ ＤＨ．Ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｌｙｔｉｃ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｃｅｌｌａ—ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００３，７７（２１）：１１７１８— １１７３２． ［１４］Ｔｙｌｅｒ ＳＤ，Ｐｅｔｅｒｓ ＧＡ，Ｓｅｖｅｒｉｎｉ Ａ．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｉｎｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ２（ＳＡ８）ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００５，３３１（２）：４２９—４４０． ［１ ５］Ｓｅｖｅｒｉｎｉ Ａ，Ｔｙｌｅｒ ＳＤ，Ｐｅｔｅｒｓ ＧＡ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａ ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｏｔｈｅｒ ｐｒｉｍａｔｅ ａｌｐｈａ— ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈｉｖｅｓ Ｖｉｒｏｌ，２０１３，１５８（８）：１８２５—１８２８． ［１６］Ｍａｃｄｏｎａｌｄ ＳＪ，Ｍｏｓｔａｆａ ＨＨ，Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＬＡ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｅ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ １ ｓｔｒａｉｎ ＭｃＫｒａｅ［刀．Ｊ Ｖｉｒｏｌ， ２０１２，８６（１７） ９５４０—９５４１． ［１７］Ｌｉｕ Ｘ，Ｈａｎ Ｚ，Ｓｈａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｉｎｋａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏｎｇ ａｎｄ ｓｈｏｒｔ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅｓ ｏｆ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ Ｃｌｏｎｅ ０３ ａｎｄ ＶＡＣ Ｓｔｒａｉｎｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ Ｊ，２０１０，８（１）：１－１２． ［１８］Ｗａｔｓｏｎ Ｇ，Ｘｕ Ｗ，Ｒｅｅｄ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａ— ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ＨＳＶ－１ ｓｔｒａｉｎ ＭｅＫｒａｅｉ＇Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１２，４３３（２）：５２８～５３７． ［１ ９］Ｇａｒｃｉａ Ｍ，Ｖｏｌｋｅｎｉｎｇ Ｊ，Ｒｉｂｌｅｔ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｌａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓ ｖａｃ— ｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｈｉｃｋｅｎ ｅｍｂｒｙｏ ｏｒｉｇｉｎ（ＣＥＯ）ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｒ— ｉｇｉｎ（ＴＣＯ）＿Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１３，４４０（１）：６４—７４． ［２Ｏ］Ｙａｎｇ Ｃ，Ｌｉ Ｑ，Ｌｉ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌ ｙｓｉｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ａ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ Ｇｅｎｅｓ，２０１４，４８（２）： ２９６—３０３． ［２ １］Ｇｒｕｆｆａｔ Ｈ，Ｍａｒｅｈｉｏｎｅ Ｒ，Ｍａｎｅｔ Ｅ．Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｌａｔｅ ｇｅｎｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ：ａ ｖｉｒａｌ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｐｒｅ－Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｓ ｋｅｙ［Ｊ］． Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２Ｏ１６，７：８６９． ［２２］Ｑｉｎ Ｈ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ＵＬ１６ ｇｅｎｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ Ｊ，２０１２，９ （１）：１－４． ［２３］Ｇａｏ Ｊ，Ｃｈｅｎｇ ＡＣ，Ｗａｎｇ ＭＳ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ～ ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＤＥＶ）ＵＳ２ ｇｅｎｅ［Ｊ］． Ｇｅｎｅｔ Ｍｏｌ Ｒｅｓ，２０１５，１４（４）：１３７７９—１３７９０． ［２４］Ｈｏｌｄｅｎ ＶＲ，Ｙａｌａｍａｎｃｈｉｌｉ ＲＲ，Ｈａｒｔｙ ＲＮ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｌｔｅａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ ｏｆ ａｎ ｅｑｕｉｎｅ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ １ ｌａｔｅ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏ～ ｄｉｎｇ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９２，１８８（２）：７０４～ ７１３． ，ｉ２５］Ｙａｍａｄａ Ｈ，Ｄａｉｋｏｋｕ Ｔ，Ｙａｍａｓｈｉｔａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｏｆ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｉｓ ａ ｃａｐｓｉｄ／ｔｅｇｕ— ｍｅｎｔ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ ｗｈｉｃｈ ｃｏｐｕｒｉｆｉｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎｕ— ｃｌｅａｒ ｍａｔｒｉｘｉ，Ｊ］．Ｊ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｉ １９９７，７８（１１）：２９２３—２９３１． ６６ 中国人兽共患病学报 ２Ｏ１７，３３（１） ［２６１ Ｚｈａｏ Ｙ，Ｗａｎｇ ＪＷ，Ｌｉｕ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＵＳ１０， ｓ３，ａｎｄ ＵＳ２ ｉｎ ｄｕｃｋ ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓ Ｇｅｎｅｓ，２００９．３８ （２）：２４３—２４８． Ｈｕｂｅｒ ＭＴ，Ｔｏｍａｚｉｎ Ｒ，Ｗｉｓｎｅｒ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ— ［２７］ ｖｉｒｕｓ ＵＳ７，ＵＳ８，ＵＳ９，ａｎｄ ＵＳ１０ ａｒｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｇｌｙｃｏｐｒｏ— ｔｅｉｎｓ，ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ ａｔ ｃｅｌ１ ｓｕｒｆａｃｅｓ，ａｎｄ ＵＳ９ ｄｏｅｓ ｎｏｔ ｍｅｄｉａｔｅ ｔｉｎｉｎ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，２０７：１３８—１４５． ［３４］Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ Ｅ，Ｄｕｎｎ ＪＲ，Ｐｅｒｕｍｂａｋｋａｍ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ— ｚｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｒｅｋ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｖｉａ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｒｉａｌ ｐａｓｓａｇｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｄｅ ｎｏｖｏ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅ— ｌｉｃａｓｅ——ｐｒｉｍａｓｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ｇｅｎｅ ＵＬ５ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ ａｓｓｏｅｉａｔ— ｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ＿Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２０Ｉ４，８８（１１）：６２３２— ６２４２． ｃｅｌｌ—ｔｏ－ｃｅｌｌ ｓｐｒｅａｄ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００２，７６（１１）：５７４８—５７５８． ［２８］Ｍａｏ ＷＦ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇ ｃｈｉｃｋｅｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ２，ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ［３５］Ｍａｏ Ｗ，Ｈｕｎｔ ＨＤ，Ｃｈｅｎｇ Ｈ Ｈ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃ— ｍａｒｅｋ＇ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅ［Ｄ］．Ｍｉｃｈｉｇａｎ：Ｍｉｃｈｉｇａｎ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１０． ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ２［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１０，３４（３）：３６０—３６８． ［２９］Ａｍｉｏｔ Ｌ，Ｖｕ Ｎ，Ｓａｍｓｏｎ Ｍ．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ＨＬＡ—Ｇ ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｒｅｓ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１４，２０１４ （２０１４）：１４３—１４６． ［３６３ Ｌｉｕ ＨＣ，Ｎｉｉｋｕｒａ Ｍ，Ｆｕｌｔｏｎ ＪＥ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ６ ｃｏｍｐｌｅｘ，ｌｏｃｕｓ Ｅ（ＬＹ６Ｅ，ａｌｉａｓ ＳＣＡ２）ａｓ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｍａｒｅｋ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｖｉａ ａ ｖｉｒｕｓ—ｈｏｓｔ ｐｒｏ— ［３Ｏ］Ｋａｕｒ Ｇ，Ｔｒｏｗｓｄａｌｅ Ｊ，Ｆｕｇｇｅｒ Ｌ．Ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｓｃｒｅｅｎ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００４，１０２ （１－４）：３０４—３Ｏ８． ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ，２０１３，１３６（Ｐｔ ９）： ２６５７—２６７６． ［３７］Ｓｏｍｍｅｒ ＭＨ，Ｚａｇｈａ Ｅ，Ｓｅｒｒａｎｏ ＯＫ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙ— ｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅｓ。ＯＲＦｓ ６３ ａｎｄ ７０ ａｎｄ ［３１］Ａｌｅｇｒｅ Ｅ，Ｒｉｚｚｏ Ｒ，Ｂｏｒｔｏｌｏｔｔｉ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｍｅ ｂａｓｉｃ ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ＨＩ Ａ—Ｇ ｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，２０１４，２０１４（１）：６５７６２５— ６５７６２５． ＯＲＦｓ ６４ ａｎｄ ６９，ｏｆ ｖａｒｉｃｅｌｌａ—ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００１， ７５（１７）：８２２４—８２３９． Ｅ３２］Ｇａｏ Ｈ，Ｃｕｉ Ｈ，Ｃｕｉ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＡ ｏｆ ＨＰＡＩ Ｈ５Ｎ１ ｖｉｒｕｓ ａｔ ＵＳ２ ｇｅｎｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ｏｆ ｔｕｒｋｅｙ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｉｎ— ［３８］Ｇｒｏｓｅ Ｃ，Ｔｙｌｅｒ Ｓ，Ｐｅｔｅｒｓ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｔｗｏ Ｖａｒｉｃｅｌｌａ—Ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ ｇｌｙｅｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ （Ｄ１５０Ｎ）ｍｕｔａｎｔ ｖｉｒｕｓｅｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ：Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｄｕｃｅｄ ｂｅｔｔｅｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ａｔ ＵＳ１０ ｇｅｎｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１０，６（７）：３００７—３０２４． ［３３］Ｚｈａｎｇ Ｆ，Ｃｈｅｎ Ｗ，Ｍａ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａ１ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏｍ— ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｉｔｅｓ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｍａｒｅｋ ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｗｉｔｈ ａｎ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｐｒｅａｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ￣．Ｊ Ｖｉｒ— ｏｌ，２００４，７８（１３）：６７９９—６８０７． ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈ９Ｎ２ ａｖｉａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｈｅｍａｇｇｌｕ— 收稿日期：２０１６—０８—０２编辑：刘岱伟 （上接第５６页） 参考文献： ［１］Ｇｕ Ｗ，Ｙｉｎ Ｊ，Ｙａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｆｒｏｍ １ ９８６ ｔｏ ２Ｏ１２ ｉｎ Ｙｕｎｏａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ ｂｏｒ— Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，２００９，４０（５）：１０１５－１０２４． Ｅ７］Ｌｕｏ Ｙ，Ｙｅ Ｊ，Ｊｉｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｏｎ一０１／ｎｏｎ Ｏ１３９ Ｗｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１３，１３：５２．ＤＯＩ：１０．１１８６／１４７１－２１８０— １３—５２ ｄｅｒｉｎｇ Ｍｙａｎｍａｒ￣Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ Ｇｅｎｅｔ Ｅｖｏｌ，２０１４，２１：１－７．ＤＯＩ： １０．１０１６／ｊ．ｍｅｅｇｉｄ．２０１３．１０．０１５ ［８］Ｘｉａｏ Ｍ，Ｌｉ ＢＳ，Ｘｉａｏ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｉｎ ２０１１—２Ｏ１３ ｆｏｒ ｎｏｎ ０１／０１３９ ［２１ Ｋａｐｅｒ ＪＢ，Ｍｏｒｒｉｓ ＪＧ Ｊｒ，Ｌｅｖｉｎｅ ＭＭ．Ｃｈｏｌｅｒａ［Ｊ１．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏ— ｂｉｏｌ Ｒｅｖ，１９９５，８（１）：４８－８６． ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｄｉａｒｒｈｅａ ｃａｓｅｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ＩＪ］．Ｃｈｉｎａ ｐｕｂ— ｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ，２Ｏ１５，３１（１）：３２—３５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［３３ Ｍｏｒｒｉｓ ＪＧ Ｊｒ．Ｃｈｏｌｅｒａ－一ｍｏｄｅｒｎ ｐａｎｄｅｍｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ａｎｃｉｅｎｔ ｌｉｎｅ— ａｇｅ［Ｊ１．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２０１１，１７（１１）：２０９９—２１０４．ＤＯＩ： １０．３２０１／ｅｉｄｌ７１１．１１１１０９ 肖嫒，李柏生，效拟，等．广东省２０１１—２０１３年腹泻病例非 Ｏ１／Ｏ１３９群霍乱弧菌耐药性及分子特征［Ｊ］．中国公共卫生， ２０１５，３１（１）：３２－３５． ［４］Ｍｏｒｒｉｓ ＪＧ Ｊｒ．Ｎｏｎ—Ｏ ｇｒｏｕｐ １ Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ：ａ ｌｏｏｋ ａｔ ｔｈｅ ｅｐｉ— ｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｎ ｏｃｃａｓｉｏｎａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ［Ｊ］．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ Ｒｅｖ，１９９０， １２：１ ７９～１ ９１． ［９］Ｌｕｏ Ｙ，Ｙｅ ＪＬ，Ｊｉｎ ＤＺ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｎｏｎ ０１ ａｎｄ ｎｏｎ Ｏ１３９ Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｎ Ｚｈｅ— ［５］Ｄｕｔｔａ Ｄ，Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ Ｇ，Ｐａｚｈａｎｉ ＧＰ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ｎｏｎ Ｏ１，ｎｏｎ一（３１ ３ ９ ｓｅｒｏｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｃｈｏｌｅｒａ—ｌｉｋｅ ｄｉａｒｒｈｅａ，Ｋｏｌｋ— ｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．Ｄｉｓ Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ，２０１１，２６（１２）：９３５—９３８． （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ａｔａ，Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２０１３，１９（３）：４６４—４６７．ＤＯＩ： １０．３２０１／ｅｉｄ１ ９０３．１２１１５６ 罗芸，叶菊莲，金大智，等．浙江省非Ｏ１、非Ｏ１３９群霍乱弧菌 快速检测与毒力基因研究［Ｊ］．疾病监测，２ｏｌ１，２６（１２）：９３５ ９３８． ［６］Ｋｏｎｄｏ Ｓ，Ａｊａｗａｔａｎａｗｏｎｇ Ｐ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ Ｏ１，Ｏ１ ３ ９ ａｎｄ ｎｏｎ－Ｏ１／ｎｏｎ－（）ｌ３９ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｔｈａｉｌａｎｄ［Ｊ］．Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ａｓｉａｎ 收稿日期：２０１６—０７—２０编辑：梁小洁
