MM_FS_CNJ_0044出口 粮谷 双苯唑菌醇 残留量 气相色谱质谱法 外标法定量
MM_FS_CNJ_0044
出口粮谷中双苯唑菌醇残留量检验方法
1.适用范围
本方法适用于出口玉米、糙米中双苯唑菌醇残留量的检验。
2.原理概要
样品中残留的双苯唑菌醇用丙酮-水提取，提取液先后经乙酸乙酯及乙腈液液分配净化，再经弗罗里硅土柱净化后，用配有氮磷检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。如有必要可用气相色谱-质谱法确证。
3.主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
丙酮、乙酸乙酯、乙醚、乙腈、正己烷：重蒸馏；
无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用；
弗罗里硅土：650℃灼烧4h，贮于密封容器中，使用前在130℃下烘2h，贮于干燥器内冷却备用；
丙酮-正己烷(3＋17)；
氯化钠：饱和水溶液；
双苯唑菌醇标准品：纯度≥98%；
双苯唑菌醇标准溶液：准确称取适量的双苯唑菌醇标准品，用丙酮配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，再根据需要用丙酮配成适当浓度的标准工作溶液。
3.2.仪器
气相色谱仪并配有氮磷检测器。必要时还需配有质谱检测器；
离心机；
旋转蒸发器；
微量注射器：10μL；
无水硫酸钠柱：6cm×1.8cm(内径)，内装5cm高的无水硫酸钠；
层析柱：30cm×1.8cm(内径)，具砂芯，柱内先装10g弗罗里硅土，再装8g无水硫酸钠。
4.试样的抽取与制备
4.1.检验批
以不超过200t为一检验批。200t袋装糙米约4000袋；袋装玉米，则约2200袋。
同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。
4.2.抽样数量
4.2.1.袋装货品
按式(1)计算抽样袋数：
a＝
……………………………(1)
式中：N——全批袋数；
a——抽样袋数。
注：a值取整数，小数部分向前进位为整数。
4.2.2.散积货品(玉米)
货堆高度不超过2m。按货堆面积划区设点，以50m2为一个取样区，每区设中心及四角(距边线1m处)5个点。每增加一个取样区，增设3个点。
4.3.抽样工具
金属单管取样器：全长55cm(包括手柄)，直径1.5～2.5cm，沟槽长度应超过袋对角线长度的一半；
金属双套管取样器：全长分1m、2m(均包括手柄)两种。内、外管同部位分段开三个槽口，每个槽口长15～20cm，口宽2.0～2.5cm。内管的内径为2.5～3.0cm；取样器的探头长约7cm；
取样铲；
分样板；
盛样器：筒或袋，可密封；
分样布或适用的铺垫物。
4.4.抽样方法
4.4.1.袋装抽样
4.4.1.1.倒包抽样：从堆垛的各部位随机抽取规定的应抽样件数的10%(每批一般不少于3袋)，将袋口缝线全部拆开，平置于分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角，提起约成45°倾角，倒拖约1m，使袋内货物全部倒出。查看袋内和袋间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，立即将样品倒入盛样器内。每袋抽取样品的量应基本一致。
4.4.1.2.袋内抽样：按规定的应抽样件(扣除倒包抽样件数)，在堆垛四周上、中、下各层以曲线形走向随机抽取。然后按糙米、玉米，用下述方法进行取样：
对糙米，用金属单管取样器，槽口朝下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将管槽旋转朝上，抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。
对玉米，用1m长的金属双套管取样器，关闭槽口，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后旋转内管以开启槽口，待样品流满内管后，再旋转内管以关闭槽口。抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。
每袋所抽取的样品的量应与4.4.1.1基本一致。每批所抽取的样品总量应不少于4kg。
4.4.2.散积抽样：按规定的取样点，逐点抽取样品。将取样器槽口关闭，以倾斜 45°角度插入粮堆至相应深度，旋转取样器内管以开启槽口，待样品流满内管后，再旋转内管以关闭槽口。抽出取样器，立即将样品倒入盛样器内。从各点中抽取的样品量应基本一致。
每批所抽取的样品总量应不少于4kg。
4.4.3.大样缩分
袋装样品：合并从袋内和倒包抽样所取全部样品，倒于分样布上，用分样板按四分法缩分样品至不少于2kg，盛于盛样器内，加封后标明标记，并及时送交实验室。
散积样品：将抽取的全部样品，倒于分样布上，以下按上述袋装样品方法进行。
4.5.试样制备
将样品按四分法缩分至1kg，全部磨碎并通过20目筛。混匀，均分成两份试样，装入洁净的容器内，密封，标明标记。
4.6.试样保存
将试样于－5℃以下避光保存。
注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
5.过程简述
5.1.提取
称取约10g试样(精确至0.1g)，置于250mL离心管中。加入20mL水，用搅棒拌匀，放置2h。
加入100mL丙酮于上述离心管中，搅拌2min，在3 000 r/min下离心5min。上清液转入250mL烧瓶中。再加入50mL丙酮，同上操作。将合并的提取液在40℃的旋转蒸发器上除去丙酮。
将烧瓶中溶液移入250mL分液漏斗，并加入50mL氯化钠饱和溶液，用100mL乙酸乙酯分数次洗涤烧瓶，并入分液漏斗，剧烈振摇5min，静置分层。收集上部乙酸乙酯层，并通过无水硫酸钠柱脱水，滤入250mL烧瓶中。再用100mL乙酸乙酯，同上操作。用少量乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠柱，合并洗液和提取液。在40℃下用旋转蒸发器蒸发近干。
加入15mL正己烷以溶解残渣，并将溶液移入125mL分液漏斗中。用30mL正己烷饱和的乙腈洗涤烧瓶，并入分液漏斗，剧烈振摇5min，静置分层，下层转入另一个125mL的分液漏斗中。再加入30mL正己烷饱和的乙腈，同上操作，合并提取液。在提取液中加入50mL乙腈饱和的正己烷，轻轻振摇数次，静置分层，将下层转入100mL鸡心瓶中，并在50℃下用旋转蒸发器蒸发近干。加入2mL正己烷以溶解残渣。
5.2.净化
在层析柱中，加入20mL正己烷，弃去流出液。待液面降至无水硫酸钠层时，将上述的提取液加入柱中，待液面降至无水硫酸钠层时，用5mL正己烷洗涤器皿，加入柱内，继用45mL正己烷、150mL丙酮-正己烷(3＋17)按序淋洗，弃去流出液。最后用130mL乙醚洗脱，收集洗脱液于150mL鸡心瓶中，在30℃下用旋转蒸发器蒸发近干。准确加入2mL正己烷以溶解残渣后，供气相色谱测定。
5.3.测定
5.3.1.气相色谱条件
色谱柱：SE-，30m×0.32mm(id)，膜厚0.25μm或相当者；
载气：氦气，纯度≥99.99%，1.2mL/min；
辅助气：氦气，纯度≥99.99%，20mL/min；
氢气：3.5mL/min；
空气：100mL/min；
色谱柱温度：
程序升温：60℃保持1min，以10℃/min速度升至290℃，保持5min；
进样口温度：250℃；
检测器温度：320℃；
进样量：1μL；
进样方式：无分流，1min后开阀。
5.3.2.气相色谱测定
根据样液中被测农药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和待测样液中农药的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作液与样液应等体积参插进样测定，在上述色谱条件下，双苯唑菌醇保留时间约为23min。
5.4.气相色谱-质谱确证
5.4.1.气相色谱-质谱条件
色谱柱：SE-，30m×0.32mm(id)，膜厚0.25μm或相当者；
载气：氦气，纯度≥99.99%，1.2mL/min；
色谱柱温度：
程序升温：60℃保持1min，以10℃/min速度升至290℃，保持5min；
进样口温度：250℃；
色谱-质谱接口温度：280℃；
进样量：2μL；
进样方式：无分流，1min后开阀；
电离能量：70eV；
电离方式：EI；
电子倍增器电压：自动调谐值加200V；
测定方式：离子监测方式；
监测离子(m/z)：170、168、141；
溶剂延迟：15min。
5.4.2.质谱确证试验
对标准溶液及样液均按5.4.1规定的条件进行测定。如果样液与标准品溶液的选择离子图中，在相同保留时间有峰出现，则用质谱图对其确证。
5.5.空白试验
除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。
6.结果计算
用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中双苯唑菌醇的残留含量：
X＝ | A·c·V | ……………………………(2) |
As·m |
式中：X——试样中双苯唑菌醇含量，mg/kg；
A——样液中双苯唑菌醇的色谱峰面积，mm2；
As——标准工作液中双苯唑菌醇的色谱峰面积，mm2；
c——标准工作液中双苯唑菌醇的浓度，μg/mL；
V——样液最终定容体积，mL；
m——最终样液所代表的试样量，g。
注：计算结果需将空白值扣除。
7.低限、回收率的测定
7.1.测定低限
本方法测定低限为0.05mg/kg。
7.2.回收率
回收率的实验数据：
玉米中双苯唑菌醇的添加浓度和回收率的数据：
添加浓度在0.05mg/kg时，回收率为93.0%；
添加浓度在0.10mg/kg时，回收率为96.8%；
添加浓度在1.00mg/kg时，回收率为95.1%。
糙米中双苯唑菌醇的添加浓度和回收率的数据：
添加浓度在0.05mg/kg时，回收率为93.4%；
添加浓度在0.10mg/kg时，回收率为95.6%；
添加浓度在1.00mg/kg时，回收率为97.4%。
8.来源：
SN 0605—1996
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